[發明專利]一種固定化微生物細胞轉化神經節苷脂的方法

有效

• 申請號: 201010609269.1
• 申請日: 2011-01-18
• 公開（公告）號: CN102154416A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 趙志全;董惠鈞
• 申請（專利權）人: 山東新時代藥業有限公司
• 主分類號: C12P19/44
• 分類號: C12P19/44;C12N11/04;C12R1/29;C12R1/13
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1.一種固定化微生物細胞轉化神經節苷脂的方法，包括以下步驟：

a.?培養轉化神經節苷脂的菌株，離心收集細胞；

b.?制備蠶絲素凝膠作為固定化材料：將家蠶蠶絲下腳料粉碎后用純凈水浸泡，高溫條件下進行脫膠處理，絲素脫膠溫度為110℃~130℃，時間為1~3小時，用純凈水洗凈后加熱溶解于氯化鈣溶液中，過濾后減壓濃縮至濃度為80g/L?~120g/L，即獲得家蠶絲素水凝膠；

c.?用固定化材料固定化細胞：固定化方法是包埋和交聯相結合，在無菌條件下，將絲素水凝膠加熱溶解與菌體混勻后放置在4℃冷卻凝結，然后切成小塊，將包埋菌體的凝膠塊在含有濃度為1%~1.5%的戊二醛溶液中交聯處理1~2小時，用純凈水洗滌干凈后再置于KCl溶液中浸泡硬化，用純凈水洗滌干凈后放置4℃保存待用；

d.?制備轉化反應緩沖液：緩沖液組成為2%磷酸氫二銨，1.5%磷酸二氫鉀，0.5%硫酸鎂，0.5%醋酸鈉，0.05%硫酸鈣，pH值為5.0~6.5；

e.?將固定化微生物細胞懸浮于反應緩沖液中填充反應柱裝置；

f.?在3~6mL/min流速、25℃~30℃溫度條件下將神經節苷脂逆向流經反應柱，進行生物轉化反應，使神經節苷脂轉化為單唾液酸四己糖神經節苷脂（GM1）。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟a所述轉化神經節苷脂的菌株為綠色小單胞菌（Micromonospora?viridifaciens，ATCC?31146）或乳酪短桿菌（Brevibacterium?casei，ATCC?35513）。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于步驟a所述轉化神經節苷脂的菌株為綠色小單胞菌（Micromonospora?viridifaciens，ATCC?31146），培養該菌株時所用培養基成分為多聚乙酰神經氨酸2~8g/L，淀粉30g/L，硫酸銨15g/L，磷酸二氫鉀1g/L，硫酸鎂0.5g/L，硫酸鋅0.3g/L。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟b所述脫膠溫度為121℃，時間為2小時。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟e所述反應填充柱為二級或多級串聯模式。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟f所述轉化溫度為30℃，流速為5?mL/min。