[發明專利]一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法

有效

• 申請號: 201010608330.0
• 申請日: 2010-12-23
• 公開（公告）號: CN102526379A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 鄭向煒;王源;馮怡;阮克鋒
• 申請（專利權）人: 上海張江中藥現代制劑技術工程研究中心
• 主分類號: A61K36/888
• 分類號: A61K36/888;A61P35/00;A61K125/00;A61K127/00;A61K131/00;A61K135/00
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本發明涉及醫藥技術領域，確切地說它是抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法。?

尖尾芋(Alocasia?eucullatta(Dour)Schott)為天南星科植物假海芋的根莖，生于山澗陰濕處，或樹旁溝邊、河邊。分布于廣東、廣西、四川等地。該植物能清熱、解毒、活血、消腫，治疔瘡、癰腫、丹毒，跌打損傷，慢性氣管炎、鉤端螺旋體病等疾病。迄今為止，對尖尾芋的研究很少，多見于一般藥效學報道。有關尖尾芋的抗癌藥理活性很少報道，僅見侯學文從中分離得到一個凝集素，其對肺腺癌細胞株P18僅有很少殺傷能力。癌癥是當今社會發病率高、死亡率高的一種頑痰，目前尚無治愈率較高的藥物的報道。本發明人在尋找中草藥抗癌活性成分過程中，發現尖尾芋提取物具有很好的抗腫瘤活性，并且從中獲得多個具有抗癌活性的二苯乙烯、二苯乙烯苷、腦苷類化合物等多種骨架類型的化合物。?

本發明的目的在于提供一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其工藝簡單實用，為尖尾芋的應用提供了廣泛的途徑。?

本發明的目的是通過如下方案實現的：以尖尾芋(Alocasia?eucullatta?(Dour)Schott)為原料，采用溶劑提取法.溶劑萃取法.樹脂吸附法，正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結舍濃縮干燥、冷凍干燥，噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋總提取物，將制成的尖尾芋總提取物作為抗癌活性成分用于治療多種癌癥。?

本發明的優點是：尖尾芋提取物工藝簡單實用，抗癌療效好，并且無毒副作用。為尖尾芋應用提供了廣泛的途徑。?

下面結合實施例對本發明做進一步詳細地描述。?

實施例：

1.溶劑提取法/溶劑萃取法全用提取制備尖尾芋提取物?

1.2kg用50％乙醇在90℃下回流，合并提取液，濃縮得到130g乙醇提取物。?將乙醇提取物混懸于水中，用乙酸乙酯萃取，經濃縮干燥即可得到尖尾芋提取物，收率為1.2％。?

2.溶劑提取法/樹脂吸附法合用提取制備尖尾芋提取物?

尖尾芋1.0kg用80％乙醇在90℃下回流，合并提取液，濃縮得到13Og乙醇提取物。乙醇提取物上D-101型吸附樹脂柱，先用水、5％乙醇/水洗脫以除去色素和雜質，而后用60％乙醇/水洗脫。其中60％乙醇/水洗脫部分減壓濃縮除乙醇，再經冷凍干燥可得到尖尾芋提取物，收率為1.0％。?

3.尖尾芋提取物的體外抑瘤實驗?

3.1細胞株、試劑及儀器?

人宮頸癌Hela細胞株購自中科院細胞庫；DMEM培養液，Gibco產品；胎牛血清，Gibco產品；胰蛋白酶，Gibco產品；DMSO溶液，sigma公司；96孔板，Corning公司；Revco?3000培養箱，Thermo公司；Multishkan?MK3酶標儀，Thermo公司。?

3.2腫瘤細胞培養方法?

人宮頸癌Hela細胞株用含10％胎牛血清的DMEM培養液培養，培養條件為37℃，5％CO₂濃度及飽和濕度。當細胞生長至對數生長期時，用25％胰酶消化細胞，洗滌吹散細胞稀釋至10⁶/ml，每孔100μL接種于96孔板，以備MTT實驗。?

3.3細胞增殖實驗(MTT法)?

尖尾芋提取物溶于DMSO溶液，取含1‰DMSO的尖尾芋提取物溶液，用含10％胎牛血清的DMEM溶液配成濃度分別為100、50、20、2μg/mL的尖尾芋提取物溶液，每孔100μL接種于96孔板，混勻，使尖尾芋提取物每孔終濃度分別達到50、25、10、1μg/mL，放入培養箱繼續培養16、32、48h。每孔加入5mg/mLMTT溶液5μL，繼續培養5h，測定各孔吸光度。以不加任何處理的培養細胞為空白對照，以單用培養細胞作為陰性對照。每個濃度梯度均設置12個平行組，分別計算細胞抑制率。按照以下公式計算抑制率：?

抑制率＝1-(實驗組吸光度平均值/對照組吸光度平均值)×100％?

結果見表1?

表1尖尾芋提取物對Hela細胞體外增殖的抑制作用?

t檢驗，*p＜0.05，**p＜0.01?

結果表明：不同濃度，不同培養時間的尖尾芋提取物可顯著抑制人宮頸癌Hela細胞的增殖，提示其可能有一定的抗癌效果。?