[發明專利]一種具抑菌活性的短肽及其應用

無效

• 申請號: 201010607835.5
• 申請日: 2010-12-28
• 公開（公告）號: CN102153626A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 張尚立;張恒;常宏文;曹慧仁
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61K38/10;A61P31/04
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

技術領域

本發明屬生物醫學領域，尤其涉及一種具有顯著抑菌活性的短肽及其應用。

背景技術

抗菌藥物的廣泛使用，大大降低了人類受細菌感染引起死亡的威脅，也產生了一些新的問題，如細菌的耐藥性。

致病菌的耐藥性已經日益嚴重地威脅著人類的健康。目前多數的常規抗生素都出現了相應的耐藥性致病株系，尋找全新類型的抗菌藥物成為解決耐藥性問題的又一課題。

抗菌肽是指分布于生物體內具有抵御外界微生物侵害、清除體內突變細胞的一類小分子多肽，與抗生素不同，抗菌肽是特定基因編碼的產物，它通過破壞細胞膜通透性使細胞內容物外流，最終導致細菌死亡。因此它不會使細菌產生抗藥性，因而避免了超級細菌的產生。

近年來，肽在人體中的作用已引起科學界的高度重視。隨著醫學及生化技術的發展，多肽類藥物將成為21世紀重要的診斷、監測、預防和治療藥。因此，開展多肽藥物的研究具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種具有顯著抑菌活性的短肽及其應用。

本發明所述具有抑菌活性的短肽，其特征在于：所述短肽為SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列。

本發明提供的具有抑菌活性的短肽不需任何修飾連接，且人工合成方便；試驗證明具有顯著的抑菌功能，同時對正常細胞無毒性。

本發明所述短肽在制備抗細菌藥物中的應用。

功能實驗顯示：本發明所述短肽抗菌譜很廣，無論是G⁺菌(革蘭氏陽性菌)、還是G^-菌(革蘭氏陰性菌)，都能被它很好地抑制，而且對真菌的抑制作用也很明顯。提示其在抗細菌藥物開發和應用方面有重要價值。

進一步的功能實驗顯示：本發明的短肽對細菌的抑制作用在10min之內就開始發揮，20min后抑制率即可達80％，45min后就可達到90％以上。本發明的短肽不僅抗菌作用很強，而且穩定性好，不僅在100℃煮沸10min，活性還能保持80％，而且在酸、堿的環境中還能發揮其良好的抑菌作用。

鑒于上述短肽的性質和功能，本領域普通技術人員可以利用分子生物學技術，根據氨基酸與密碼子的對應關系反推出核酸序列作為功能基因，用于制備轉基因動物或植物以表達功能蛋白，并用于藥物的開發和臨床治療。

具體實施方式

實施例1

本發明所述短肽的設計與合成

1、依據目前國際主要抗菌肽數據庫(http://www.imtech.res.in/raghava/antibp/；http://aps.unmc.edu/AP/main.php；http://www.bbcm.univ.trieste.it/；http://penbase.immunaqua.com/)中登陸的抗菌肽的序列，分析其一級結構與活性的關系的對應關系，設計人工短肽序列。

2、利用蛋白質分析數據庫http://www.expasy.org/分析已知活性的多肽序列與設計的多肽序列的二級結構的相似度，結合其它物理化學參數預測進行設計序列的修正。

3、將設計的人工短肽序列送至生物公司合成或利用自動多肽合成儀合成序列。HPLC檢測純度要大于96％，同時通過質譜檢測確定多肽合成質量。樣品以凍干狀態保存。

4、合成后的多肽進行抑菌功能檢測篩選。

5、通過功能檢測，最終獲得具有抑菌功能的多肽序列，其氨基酸序列具體是：Arg?Gln?Lys?Arg?Pro?Glu?Arg?Lys?Asn?Thr?Gly?Phe?Leu?Pro?Glu?Arg?Ile?Pro?Pro。

實施例2

利用液體生長抑制法檢測本發明所述短肽的抑菌活性

2.1?材料、試劑

1)本發明所述短肽由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，氨芐青霉素(Amp)為solarbio公司產品，一次性濾器，為美國PALL公司產品，其它藥品試劑為國產分析純。