[發(fā)明專利]吳茱萸及其提取物的高壓液相指紋圖譜的建立方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010606325.6
• 申請日: 2010-12-27
• 公開（公告）號: CN102141555A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張麗艷;羅君;楊玉琴;張麗麗;陳新華;李健;何平;王暉;潘雯婷;黃健
• 申請（專利權(quán)）人: 貴陽中醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: G01N30/36
• 分類號: G01N30/36;A61K36/754
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種貴州余慶GAP基地吳茱萸高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟一，供試品溶液的制備：

精密稱取干燥至恒重的樣品粉末0.1g～1g，過60目篩，置于具塞錐形瓶中，加入體積比為45％～90％的甲醇溶液25mL～50mL，稱重，超聲處理10分鐘～90分鐘，放冷，稱重，補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液適量，以0.45μm微孔濾膜濾過，即得；

步驟二，高效液相色譜分析：

精密吸取步驟一的供試品溶液2μL～20μL進(jìn)樣，色譜條件如下：色譜柱為Diamonsil?C₁₈柱，填料粒徑2μm～8μm，柱長150mm～250mm，柱溫：20℃～35℃；流速：0.8mL·min^-1～1.2mL·min^-1；色譜峰光譜采集范圍：190nm～400nm，流動相按體積比由甲醇-0.01～0.02％磷酸水溶液(pH?2.95～3.05)混合而成，采用線性梯度洗脫方式：從0分鐘→35分鐘→40分鐘→53分鐘→56分鐘→80分鐘，甲醇比例：15％→31％→50％→53％→72％→95％(體積比)，0.02％磷酸水溶液比例：85％→69％→50％→47％→28％→5％(體積比)，檢測波長250nm±2nm；得到吳茱萸HPLC指紋圖譜；

步驟三，分析比較：

測定12批吳茱萸藥材樣品高效液相色譜指紋圖譜并進(jìn)行分析比較，得到由其共有特征峰構(gòu)成的吳茱萸藥材指紋圖譜，該指紋圖譜具有的22個共有峰的保留時間t_R分別為：10.0分鐘、12.5分鐘、14.0分鐘、16.5分鐘、17.4分鐘、18.7分鐘、23.0分鐘、24.6分鐘、26.1分鐘、28.2分鐘、30.1分鐘、36.3分鐘、47.7分鐘、50.0分鐘、51.9分鐘、52.6分鐘、62.3分鐘、65.4分鐘、69.4分鐘、79.5分鐘、81.1分鐘、82.6分鐘。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：保留時間t_R＝26.1分鐘的第9號峰為綠原酸，t_R＝65.4分鐘的第18號峰為吳茱萸堿，t_R＝69.4分鐘的第19號峰為吳茱萸次堿。

3.一種貴州余慶吳茱萸提取物高效液相色譜指紋圖譜的建立方法：

步驟一，吳茱萸提取物的制備：

吳茱萸水提取物的制備：稱取適量吳茱萸，用5～15倍量水回流提取1～3次，每次0.5小時～3小時，合并濾液，置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸至相對密度為1.20～1.35的稠膏，然后后將稠膏置減壓干燥箱內(nèi)于0.02Mpa～0.15Mpa，40℃～60℃下干燥24小時～48小時，取出研碎即得；

吳茱萸醇提取物的制備：稱取適量吳茱萸，用5～15倍量60％～80％(體積比)的乙醇回流提取1～3次，每次2～4小時，合并濾液，置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸至相對密度為1.20～1.35的稠膏，后將稠膏置減壓干燥箱內(nèi)于0.02Mpa～0.15Mpa，40℃～60℃下干燥24h～48h，取出研碎即得；

步驟二，供試品溶液的制備：

供試品溶液的制備：稱取0.1g～1g干燥的粉浸膏，精密稱定，置于50mL的具塞錐形瓶中，加入45％～90％甲醇(體積比)25ml～50mL，稱重，超聲提取10分鐘～90分鐘，放冷，稱重，補足減失的重量，濾過，去續(xù)濾液適量，以0.45μm微孔濾膜濾過，即得；

步驟三，高效液相色譜分析：

高效液相色譜分析：精密吸取供試品溶液2μL～20μL進(jìn)樣，色譜條件如下：色譜柱ZORBAX?Eclipse?XDB-C₁₈分析柱，填料粒徑5μm，柱長150mm，柱內(nèi)徑4.6mm，柱溫20℃～35℃，流動相為乙腈-0.1％(體積比)甲酸水溶液(pH?2.55～2.65)混合而成，采用流動相二元梯度洗脫系統(tǒng)：0分鐘→5分鐘→38分鐘→65分鐘，乙腈：5％→5％→23％→100％，0.1％甲酸(體積比)水溶液95％→95％→77％→0％，流速為1mL·min^-1，檢測波長為258nm±2nm；得到吳茱萸提取物HPLC指紋圖譜；

步驟四，分析比較：

測定吳茱萸提取物樣品高效液相色譜指紋圖譜并進(jìn)行分析，得到由其特征峰構(gòu)成的吳茱萸提取物指紋圖譜，該指紋圖譜具有的20個特征峰的保留時間tR分別為：

吳茱萸醇提取物的保留時間：9.6分鐘、12.2分鐘、13.2分鐘、15.9分鐘、16.4分鐘、20.8分鐘、21.3分鐘、22.9分鐘、24.4分鐘、25.7分鐘、28.3分鐘、35.7分鐘、39.2分鐘、40.3分鐘、41.3分鐘、53.3分鐘、54.0分鐘、55.6分鐘、56.6分鐘、66.1分鐘。

吳茱萸水提取物的保留時間：9.6分鐘、12.1分鐘、13.2分鐘、15.9分鐘、16.4分鐘、20.8分鐘、21.3分鐘、22.9分鐘、24.4分鐘、25.6分鐘、28.2分鐘、35.7分鐘、39.1分鐘、40.2分鐘、41.6分鐘、53.3分鐘、54.0分鐘、55.5分鐘、56.6分鐘、63.8分鐘。