[發(fā)明專利]黃熱病毒熒光定量PCR檢測(cè)新方法及黃熱病毒檢測(cè)PCR體系

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010605474.0
• 申請(qǐng)日: 2010-12-24
• 公開（公告）號(hào): CN102277446A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊宇;王靜;胡孔新;白琳;張曉龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 北京中創(chuàng)陽(yáng)光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11003
• 代理人: 尹振啟

1.黃熱病毒熒光定量PCR檢測(cè)新方法，其特征在于，該方法中設(shè)計(jì)采用的引物探針為：

??Name??Sequence??Position??Tm℃??Modification??FP??ATGTCTGGTCGTAAAGCTCAGG??119-140??58.7??RP??AGGTCCAGGTCTGTTTCCAAT??218-238??57.6??Probe??TCAATATGGTACGACGAGGAGTTCGC??156-181??67.7??FAM/BHQ-1

2.如權(quán)利要求1所述的黃熱病毒熒光定量PCR檢測(cè)新方法，其特征在于，該方法具體為：

1)設(shè)計(jì)引物探針；

2)根據(jù)儀器選擇熒光素；

3)合成引物和探針；

4)制備陽(yáng)性質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品；

5)運(yùn)行PCR；

6)數(shù)據(jù)分析；

7)提取病毒RNA進(jìn)行體系驗(yàn)證。

3.如權(quán)利要求2所述的黃熱病毒熒光定量PCR檢測(cè)新方法，其特征在于，所述步驟2)中熒光素的供選擇的熒光發(fā)射基團(tuán)有6-FAM、TET、HEX、JOE、CY3、CY5、TAMRA、Texas?Red，熒光淬滅基團(tuán)有BHQ-1、BHQ-2、Lowa?Black^TMRQ、Lowa?Black^TMFQ、Dabcyl。

4.如權(quán)利要求2所述的黃熱病毒熒光定量PCR檢測(cè)新方法，其特征在于，所述步驟4)中采取基因合成方式制作陽(yáng)性質(zhì)粒CBG228-3作為陽(yáng)性樣品：將引物設(shè)計(jì)過(guò)程中篩選出的高保守區(qū)域bp119-bp238前后分別延長(zhǎng)30～50bp進(jìn)行基因合成，然后將其克隆至pMD19-T載體中，即為所述陽(yáng)性質(zhì)粒樣品，編號(hào)CBG228-3。

5.如權(quán)利要求2所述的黃熱病毒熒光定量PCR檢測(cè)新方法，其特征在于，所述步驟5)中熒光定量PCR反應(yīng)適用于所有熒光定量PCR反應(yīng)儀。

6.權(quán)利要求2中所述的黃熱病毒熒光定量PCR檢測(cè)新方法，其特征在于，所述熒光定量PCR反應(yīng)儀包括SmartCyclerII、ABI實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)、BioRad實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)系統(tǒng)、Stratagene定量多聚酶鏈反應(yīng)儀。

7.如權(quán)利要求1所述的黃熱病毒熒光定量PCR檢測(cè)新方法，其特征在于，所述步驟5)中最佳擴(kuò)增條件為：