[發明專利]一種蟲草菌絲體中粗多糖含量的測定方法

有效

• 申請號: 201010604944.1
• 申請日: 2010-12-24
• 公開（公告）號: CN102252978A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 趙曉娟;李星芝;童艷
• 申請（專利權）人: 天津天獅生物發展有限公司;天津天獅生命源有限公司;天獅集團有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

技術領域

本發明涉及一種粗多糖的測定方法，特別是涉及一種蟲草菌絲中粗多糖含量的測定方法。

背景技術

蟲草多糖是蟲草體內含量最豐富、最重要的生物活性物質之一，蟲草多糖是由甘露糖、蟲草素、腺苷、半乳糖、阿拉伯糖、木糖精、葡萄糖、巖藻糖組成的多聚糖。大量醫學實驗證實，蟲草多糖可活化巨噬細胞，刺激抗體產生，提高人體免疫能力，升高白細胞抑制腫瘤生長，并具有抗腫瘤、抗輻射、降血糖和脂蛋白、止咳、化痰、潤肺和延緩衰老等藥理作用，此外，蟲草多糖還能抗心律失常，抗心肌缺血，擴張外周血管，降壓，降血脂，抑制血小板聚集。

目前，蟲草菌絲體中的粗多糖含量的測定方法通常采用苯酚-硫酸法或蒽酮-硫酸法，均是以葡萄糖或葡聚糖為標準品，通過繪制標準曲線，進而對蟲草菌絲體樣品中的粗多糖含量進行定量。其步驟主要包括：1、對樣品進行預處理；2、繪制葡萄糖或葡聚糖標準曲線；3、通過標準曲線測定樣品的含量；為了使得測定的結果能夠反應蟲草菌絲體中粗多糖的真實含量，對不同批次樣品進行含量測定時，均需繪制標準曲線。這種方法即耗時又消耗實驗試劑；另外在配制標準溶液和繪制標準曲線時還會因稱量、定容、稀釋等操作步驟產生人為誤差，影響結果的準確性。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術中的不足，提供一種能夠快速、準確地測定蟲草菌絲體中粗多糖的含量，操作方法簡便、人為誤差少的蟲草菌絲中粗多糖含量的測定方法。

本發明的技術方案概述如下：

一種蟲草菌絲體中粗多糖的測定方法，包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備：

a、稱取m克的蟲草菌絲體供試品，置于體積為V₁mL的容量瓶中，加入所述V₁mL容量瓶體積的2/3的蒸餾水，在100℃恒溫水浴中浸提3-8小時，定容至V₁mL，過濾，除去不溶雜質，收集濾液；

b、吸取濾液V₂mL，加入4倍于V₂ml的無水乙醇，用于沉淀濾液中的多糖，醇沉6-8小時，離心，收集多糖沉淀；

c、將所述多糖沉淀溶于V₃mL蒸餾水中，使沉淀溶解，即得到供試品溶液；

(2)標準曲線的制備：

a、將純度大于99.0％的葡萄糖標準品于80℃干燥至恒重，精確稱取0.01g，置于100ml容量瓶中，加入80ml蒸餾水，超聲15分鐘，使葡萄糖充分溶解，放冷至室溫，定容搖勻，即得0.10mg/mL葡萄糖標準溶液；

b、精密吸取所述葡萄糖標準溶液0ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.0ml，分別置于6個10ml具塞試管中，分別加蒸餾水使體積為1.0ml，再加質量濃度為5％的苯酚水溶液1.0ml，搖勻，滴加濃硫酸5.0ml，振蕩搖勻后置沸水浴中加熱15min，冷卻至室溫，得到標準待測液；用光程為1cm的比色皿，在490nm波長處測定各個標準待測液的吸光度，以標準待測液中葡萄糖的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制出標準曲線；

(3)蟲草菌絲體中粗多糖吸收系數的確定：

a、供試品待測液的制備：取步驟(1)獲得的供試品溶液V₄mL，加蒸餾水使體積為1.0ml，加質量濃度為5％的苯酚水溶液1.0ml，搖勻，滴加濃硫酸5.0ml，振蕩搖勻后置沸水浴中加熱15min，冷卻至室溫，得到供試品待測液，體積記為V₅；

b、吸收系數的確定：用光程為1cm的比色皿，在490nm波長處測定所述供試品待測液的吸光度；由步驟(2)所得標準曲線中吸光度A與濃度C的對應關系，得到供試品待測液中粗多糖的濃度C，根據朗伯-比爾定律A＝ECL，計算出供試品待測液中粗多糖的吸收系數E₁；

(4)按步驟(1)-(3)重復n次，獲得多個供試品待測液的吸收系數E₂、E₃、E₄……En，計算E₁、E₂、E₃、E₄……En的平均值E，即為蟲草菌絲體中粗多糖的吸收系數；

(5)利用確定的吸收系數E根據下述公式計算蟲草菌絲體中粗多糖的含量：

a、按照步驟(1)所述的方法另取M克蟲草菌絲體，制備蟲草菌絲體溶液，獲得該溶液的V₁、V₂、V₃值；