[發明專利]新型抗生素納米生物傳感器的制備方法

無效

• 申請號: 201010601968.1
• 申請日: 2010-12-23
• 公開（公告）號: CN102175742A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 張娟琨
• 申請（專利權）人: 天津前方科技有限公司
• 主分類號: G01N27/416
• 分類號: G01N27/416;G01N27/26
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 王融生

1.一種新型抗生素納米生物傳感器的制備方法，其特征在于：

使用的實驗材料和儀器：

p<100>單晶硅片，其電阻率O.15～0.2Ω·cm；

牛血清白蛋白(BSA)；

0.2mol/L?pH＝7.0的PBS緩沖液；

四環素；

雙氧水；

氨水；

3-氨丙基三乙氧基硅烷；

制備實驗方法：

多孔硅的制備與氧化膜的形成

選擇p<100>單晶硅片通過陽極電化學脈沖腐蝕制備多孔硅，控制脈沖頻率為20HZ，脈沖幅度為8mv，占空比為0.5，腐蝕時間1h，該腐蝕過程在自制的聚四氟乙烯容器中進行，選擇鉑柱電極為陰極，硅片為陽極；腐蝕液體積比為V(48％HF)∶V(無水乙醇)∶V(H₂O)＝1∶1∶2；

剛制備好的多孔硅片用去離子水沖洗，用0.5％(V/V)的雙氧水做電解液進行陽極氧化，處理20min，使多孔硅表面形成一層很薄的氧化膜，然后將多孔硅片浸入V(NH₃)∶V(H₂O₂)∶V(H₂O)＝1∶1∶10組成的混合溶液中，70℃，保溫20min，進行親水化處理，以改變多孔硅表面的氧化層的疏水性，同時使多孔硅表面更加均勻；處理完畢后用蒸餾水沖洗干凈，在真空干燥箱中200℃干燥處理1h；

適配子的固定化：

用APTES修飾多孔硅表面；將APTES與去離子水按1∶10的比例混合，用1mol/L的HCl溶液調整此混合液的pH為7.0；混合液在53℃恒溫水浴，把制備好的多空硅片浸入上述溶液中，反應3h；然后用去離子水沖洗干凈，在真空干燥箱中干燥處理；

取10μL2.5％的戊二醛溶液鋪展于上述APTES修飾過的多孔硅片上，室溫環境2h，使其充分反應；然后用去離子水沖洗，室溫晾干；將5ng/μL的四環素適配子溶液10μL鋪展于上述修飾過的多孔硅片上，室溫過夜，使其充分反應，然后用去離子水沖洗；用2.0mg/mL?BSA溶液封閉多孔硅的空白位點；之后用大量pH?7.0的PBS溶液沖洗，儲存于真空干燥器中；

交流阻抗法測：

電化學檢測采用三電極體系：由多孔硅傳感器作為工作電極，鉑柱電極作為對電極，Ag/AgCl作為參比電極：在電化學交流阻抗法測量中，頻率掃描的范圍選擇0.01～100kHz，在開路電位下從高頻100kHz開始掃描，掃描速度5mV/s，在ZAHNER?Im6/6ex電化學工作站上進行測量；

待測物的檢測：

待測物溶液即鹽酸四環素溶液由PBS緩沖液配制而成；由于多孔硅材料的重復性，將待測物逐級滴加到檢測體系中，使待測物的濃度逐漸提高；在電化學系統穩定1h之后，每隔15min向體系中滴加1次待測物，使其質量濃度逐級達到2.079～207.9nM，分別檢測各個質量濃度對應的交流阻抗譜。