[發明專利]生物牙根支架材料的構建方法

有效

• 申請號: 201010597640.7
• 申請日: 2010-12-21
• 公開（公告）號: CN102068318A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發明（設計）人: 郭維華;田衛東;李銳;楊波;盛磊;陳崗
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: A61C8/00
• 分類號: A61C8/00;A61L27/36
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 劉雪蓮

技術領域

本發明公開了一種生物牙根支架材料的構建方法。

背景技術

目前，各種原因所致的牙齒缺失患病率隨年齡增長而增加，到中老年患病率約為80％。牙齒缺失與牙發育異常嚴重妨礙患者的咀嚼、語言等功能，并引起患者容貌畸形、認知缺陷、心理障礙，從而極大地危害了患者的身心健康，因此，尋求有效的治療途徑是迫切而艱巨的任務。

目前的牙齒缺失均采用人工材料贗復體修復，存在著生理功能恢復有限、使用壽命短、損傷正常組織等缺陷，缺乏真正生理意義的修復。種植體修復缺失牙是目前治療牙缺失的熱點和重點，但種植體與牙周組織只能實現骨性結合，無法獲得新生的牙周膜等缺點。如何有效地在目前的修復方法基礎上，獲得新生的牙骨質、牙周膜和牙槽骨，是治療牙缺失的關鍵。

支架材料和誘導微環境問題是進行牙根再生組織工程的重要問題。近年來，隨著對各種支架材料研究的深入，采用生物有機材料作為支架材料應用于牙根組織工程已成為研究熱點，腸系膜、煅燒牛骨、牙本質基質等均有應用報道。對牙本質的組織學和蛋白組學的研究表明：在牙本質中存在多種對于牙齒發育和牙齒受到損傷后修復過程中重要的蛋白和因子，其中很多都有很強的表達或者較高的含量。Guo等以大鼠的牙本質為研究對象，在牙本質周圍成功的誘導了牙骨質、牙周膜以及神經血管的再生（Weihua?Guo,?Yong?He,?Xiaojun?Zhang,et?al,?The?use?of?dentin?matrix?scaffold?and?dental?follicle?cells?for?dentin?regeneration，Biomaterials?2009；30:?6708-6723）。Guo等的研究顯示：相對于其他生物支架材料，牙本質基質可以更好的誘導分化為成牙骨質細胞樣細胞、成骨細胞樣細胞以及成纖維細胞樣細胞，形成類似天然的牙周膜樣結締組織和牙周膜/牙骨質復合體的結構，有利于生物牙根的重建，這是區別于其他生物支架材料的重要特征之一。但該研究中所制備的牙本質基質為老鼠牙本質，與人類等其他物種的牙本質存在一定不同，構建出的組織為牙本質、無法設計成為牙根形的支架材料，并且，生物牙根材料在不能破壞牙本質基質中的重要生物活性物質，以保證這些生物活性物質可以持續的從材料中釋放到周圍環境中的同時，需盡量保持牙根的形狀、保持該材料具有一定的力學強度并且充分脫礦，以利于牙髓和牙周組織的軟組織和硬組織的共同構建。同時，Guo的研究中使用的異位的牙本質的再生，對于牙槽骨內的再生情況并沒有進行相應的討論。綜上所述，該研究并未實現真正意義上的生物牙根支架材料的重建。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中所存在的上述不足，提供一種生物牙根支架材料的構建方法。本發明的構建方法容易掌握、安全可行、成本低廉。

為了實現上述目的，本發明提供了以下技術方案：

一種生物牙根支架材料的構建方法，包括以下步驟：

（1）將供體新鮮的牙齒在無菌狀態下，用PBS緩沖液沖洗；

（2）將步驟（1）所得牙齒在有噴水裝置的牙科用慢速渦輪機上磨除牙冠部分，保留牙根部分，所述牙科用慢速渦輪機的轉速為1000-10000轉/分，所得牙根部分保存于含有PBS緩沖液的培養瓶或其他器皿中；

（3）用牙科用拔髓針拔出步驟（2）所得牙齒牙根內的牙髓組織，用生理鹽水反復沖洗牙齒根管內部3-8次，每次10-30毫升；

（4）使用牙科用擴大機器將步驟（3）所得牙齒內部逐漸擴大，去除牙髓組織和前期牙本質等組織，此過程中使用5%-17%的EDTA溶液反復沖洗根管內部3-8次，每次10-30毫升；

（5）使用牙科用渦輪機按照生物牙根外形磨除部分牙齒組織，以去除牙周組織和牙骨質等組織。最終得到的材料厚度1-3mm，長度1-2.5cm；

（6）將步驟（5）處理好的牙齒保存于PBS緩沖液中，于超聲震蕩器中處理3-8次，每次處理10-30min；

（7）在轉速為100-500轉/分的磁力攪拌器中，使用不同濃度的EDTA對牙本質進行梯度脫礦，得到牙本質基質。

將步驟（7）處理好的牙本質基質保存于含有雙抗的PBS緩沖液中備用，所述含雙抗的PBS中青霉素濃度為50-500unit/mL,鏈霉素濃度為50-500unit/mL。