[發明專利]用于感染性腹瀉的檢測型基因芯片及檢測用試劑盒

無效

• 申請號: 201010597298.0
• 申請日: 2010-12-20
• 公開（公告）號: CN102140507A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發明（設計）人: 王磊;周光朋;劉衍偉;曹勃陽;竇巖
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種用于感染性腹瀉的檢測型基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡聚核苷酸探針，其特征在于所述的寡聚核苷酸探針包含從具有明顯生物進化優勢的gyrB基因、ITS基因及dnaJ、toxR等基因上選取的DNA片段或其互補的DNA片段。

2.權利要求1所述的基因芯片，其中的寡聚核苷酸探針為下述DNA片段中的至少一種：

①大腸桿菌(E.coli)/志賀氏菌(Shigella)、小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersiniaenterocolitica)及親水氣單胞菌(Aeromonas?hydrophila)gyrB基因中所選取的至少一種DNA片段；

②沙門氏菌(Salmonella)、霍亂弧菌(Vibrio?cholerae)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)ITS基因中選取的至少一種DNA片段；

③河流弧菌(Vibrio?fluvialis)、擬態弧菌(Vibrio?mimicus)、弗尼斯弧菌(Vibriofrnissii)的dnaJ基因中選取的DNA片段；

④霍利斯弧菌(Vibrio?hollisae)、少女魚弧菌(Vibrio?damsela)toxR基因中選取的DNA片段；

⑤鄰單胞菌hugA基因中選取的DNA片段；

⑥志賀氏菌ipaH基因中選取的DNA片段；

⑦①或②或③或④或⑤或⑥中選取的DNA片段的互補DNA片段。

3.權利要求1所述的基因芯片，其中所述寡聚核苷酸探針具有SEQ?ID?NO：1-31所示的核苷酸序列或不同于SEQ?ID?NO：1-31但編碼的氨基酸序列與SEQ?ID?NO：1-31所編碼的氨基酸序列相同的核苷酸序列。

4.權利要求1所述的基因芯片，其中所述的感染性腹瀉為：引起人類感染性腹瀉的大腸桿菌、志賀氏菌、沙門氏菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、親水氣單胞菌、鄰單胞菌、霍利斯弧菌、河流弧菌、擬態弧菌、少女魚弧菌、弗尼斯弧菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌。

5.權利要求1所述用于感染性腹瀉的檢測型基因芯片的制備方法，其特征在于：按如下的步驟進行：

1)根據病原菌的gyrB基因、ITS基因、dnaJ基因及toxR基因、hugA基因、ipaH基因保守區設計并制備出用于PCR擴增的引物；?

2)制備待測樣品的基因組DNA，使用步驟1)中的引物，對待測樣品基因組DNA進行PCR擴增，得到靶序列；

3)標記步驟2)中得到的靶序列；

4)將標記后的靶序列與上述的基因芯片雜交；

5)用生物芯片掃描儀獲取雜交信號并分析雜交結果。

其中，步驟1)中所述的引物包括SEQ?ID?NO：32-45所示的核苷酸序列的至少一種。

6.一種采用權利要求1所述基因芯片檢測感染性腹瀉的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括SEQ?ID?NO：1-31的核苷酸序列或其互補核苷酸序列的至少一種；還包含PCR擴增的引物，該引物具有SEQ?ID?NO：32-45的核苷酸序列的至少一種；

7.權利要求6所述的試劑盒的應用，其特征在于，可用于引起人類感染性腹瀉的大腸桿菌、志賀氏菌、沙門氏菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、親水氣單胞菌、鄰單胞菌、霍利斯弧菌、河流弧菌、擬態弧菌、少女魚弧菌、弗尼斯弧菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌的至少一種致病菌的檢測。?