[發明專利]八月紅梨果實可溶性糖含量的分子標記

無效

• 申請號: 201010596658.5
• 申請日: 2010-12-21
• 公開（公告）號: CN102115791A
• 公開（公告）日: 2011-07-06
• 發明（設計）人: 張紹鈴;李秀根;張瑞萍;吳俊;吳華清;陶書田;齊開杰;楊健;王龍;王蘇珂
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

一、技術領域

本發明提供了八月紅梨果實可溶性糖含量的分子標記，屬于分子遺傳育種領域，可用于梨果實可溶性糖含量性狀的早期分子輔助選擇，以提高育種效率。

二、背景技術

梨(Pyrus?L.)原產我國，是我國第三大果樹樹種。梨因其果實營養價值高，香甜多汁，而深受消費者喜愛。可溶性糖含量是影響梨果品質風味的重要因素之一，是決定甜度口感的首要因素，而我國消費者普遍喜愛高甜度口感的梨，因此培育果實可溶性糖含量高的品種已經成為梨育種的重要目標之一。

由于梨為多年生木本果樹作物，與果實品質相關的性狀大都是由多基因控制、易受環境影響的數量性狀，在分離后代表現為廣泛的表型變異，其基因型與表現型間的對應關系難以確定。而以往的傳統育種是基于經典數量遺傳學理論，把控制某一性狀的多個基因作為整體進行研究和選擇，在現有基礎上改良目標性狀難度越來較大。近年來，隨著分子標記技術的迅速發展、高密度的分子遺傳圖譜的出現，以及數量性狀作圖方法的不斷完善，使得數量性狀基因座(Quantitative?trait?loci，QTL)定位變成了現實，也為提高目標數量性狀優良基因型選擇的可能性、準確性及預見性奠定了基礎。利用分子標記定位數量性狀QTL，其實質就是分析分子標記與目標性狀QTL之間的連鎖關系，即利用已知座位的分子標記來定位未知座位的QTL，通過計算分子標記與QTL之間的交換率，來確定QTL的具體位置。基于獲得的標記基因型分離與數量性狀的量之間的關系，可直接把握數量性狀基因，并開發可應用于分子標記輔助選擇（Molecular-assisted?selection，MAS）育種的技術，這已在許多重要農作物上取得了成功應用。

目前有關梨數量性狀的QTL定位研究仍屬起步階段，已有的研究主要是針對一些病害或生長性狀，對重要品質性狀梨可溶性糖含量的QTL定位及分子標記的研究尚沒有開展。因此，開展梨果實可溶性糖含量主效基因的QTL定位，篩選緊密連鎖的分子標記，建立雜交后代早期輔助選擇技術體系，對于提高梨果可溶性糖含量品質改良效率，縮短育種進程，節約生產成本顯得尤為重要。

三、發明內容

技術問題

本發明的目的是定位梨果實可溶性糖含量QTL，并提供與QTL位點緊密連鎖的分子標記，通過檢測這些分子標記可以預測梨果實可溶性糖含量，為實現對該性狀的早期鑒定和篩選提供分子輔助選擇技術支持。

技術方案

一種梨果實可溶性糖含量QTL連鎖的分子標記，是通過下列步驟獲得：

a）利用梨品種‘八月紅’和‘碭山酥梨’雜交獲得F₁后代單株；

b）采用SRAP引物me6：5'-TGAGTCCAAACCGGTAG-3'和pm19：5'-?CTTCAAGCGGTGCATTCC-3'以梨基因組DNA為模板進行PCR擴增，擴增產物在8%非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離，對‘八月紅’和‘碭山酥梨’及其雜交后代基因組DNA進行分析，統計分析在親本間具有多態性的位點在后代群體中的遺傳類型，將得到的多態性標記位點導入Joinmap3.0作圖軟件，構建‘八月紅’梨的遺傳連鎖圖譜；

c）對‘八月紅’和‘碭山酥梨’雜交后代的F₁群體單株的果實可溶性糖含量進行測定，利用MapQTL5.0作圖軟件的區間作圖法，將F₁群體每個單株的果實可溶性糖含量與‘八月紅’梨遺傳連鎖圖譜中的分子標記進行連鎖和QTL分析，以LOD值≥2.5為標準，大于2.5說明存在一個QTL位點，檢測到在母本‘八月紅’的第4連鎖群上檢測到可溶性糖含量的QTL位點Psg-1，其LOD值為2.56，是主效QTL，距離最近的一個分子標記為me6pm19-1300，大小為150bp，距Psg-1的距離為0cM，該標記可以作為梨果實可溶性糖含量的標記。所述QTL位點Psg-1位于‘八月紅’梨第?7連鎖群上，其解釋12.4%的可溶性糖含量特征。

所述分子標記在梨分子育種中的應用，其特征在于：用梨基因組DNA，采用SRAP引物me6：5'-TGAGTCCAAACCGGTAG-3'和pm19：5'-?CTTCAAGCGGTGCATTCC-3'進行PCR擴增，擴增產物在8%非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離后，如果獲得一個分子標記大小為1300bp，則表明梨果實可溶性糖含量的主效QTL位點存在，該QTL位點Psg-1位于‘八月紅’梨第4連鎖群上，其解釋12.4%的可溶性糖含量特征。

有益效果