[發明專利]檢測呋喃妥因的磁顆粒化學發光試劑盒及其應用

無效

• 申請號: 201010592925.1
• 申請日: 2010-12-16
• 公開（公告）號: CN102539414A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 何方洋;萬宇平;羅曉琴;常平平;陳煒玲;蒲小蓉;段盈盈
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/577;G01N33/533
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技術領域

本發明涉及一種直接化學發光檢測試劑盒及其測試方法，特別是檢測飼料樣本中呋喃妥因殘留量的磁顆粒競爭直接化學發光檢測試劑盒。?

技術背景

硝基呋喃類藥物是人工合成的廣譜抗生素，它有非常好的抗菌作用和藥動力學的特性，曾經被廣泛應用作為家畜、家禽、人工養殖水產品的促生長添加劑。但通過長期的實驗研究發現，硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實驗動物發生癌變和基因突變，并由此推斷，人類長期使用該類藥物或長期食用添加該類促生長添加劑的家禽、家畜、人工養殖水產品，同樣也可以發生癌變和基因突變。所以此類藥物禁止在治療和飼料中使用。?

目前，呋喃妥因殘留量的常規檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、超高效液相色譜法(UPLC)和酶聯免疫吸附法(ELISA)等。?

1、高效液相色譜法(HPLC)具有檢測精度高、假陽性率低的特點。HPLC法的主要缺點是儀器價格昂貴，操作比較繁瑣，耗時長，檢測費用昂貴，對檢測人員專業要求較高，樣本前處理較復雜。?

2、超高效液相色譜法(UPLC)，在分析時間和溶劑用量上遠遠優于液相色譜法，尤其是對基質復雜的痕量組分測定時顯示出其良好的優越性。即使這樣，UPLC都未能解決儀器造價昂貴，操作步驟繁瑣，樣本前處理復雜，對操作人員專業素養要求高等問題。?

3、酶聯免疫吸附法(ELISA)是20世紀70年代出現，用于微量物質的檢測，最早應用于傳染病、腫瘤標志物、激素水平等臨床檢測，90年代開始在我國食品安全檢測領域推廣應用，目前依托ELISA技術的試劑盒、試紙條已經成為食品安全快速檢測領域的主導產品，同時也是我公司研發和銷售的主要產品類型。酶聯免疫檢測法基于抗原-抗體的特異性反應，檢測靈敏度較高、特異性?較好，技術操作簡易，容易掌握，確實解決了大量的以前難以解決的許多微量小分子物質如抗生素、激素、農藥殘留等的定性、定量分析工作，對食品安全快速檢測技術的發展起到了積極的促進作用。但是，ELISA方法存在許多自身無法克服的缺陷，主要表現在：?

1)非均相反應：檢測過程中為分離游離物與結合物，需要多步洗板過程，耗時費力，難以提高操作的自動化程度。?

2)酶催化反應：借助酶催化底物顯色，測定反應液吸光度值。反應的時間與溫度對酶活力存在較大影響，試劑穩定性差。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種呋喃妥因檢測試劑盒，采用該試劑盒進行呋喃妥因的檢測時不僅具備較高的靈敏度，特異性，而且具有較高的反應速度。?

本發明的另一個目的在于提供一種呋喃妥因的測試方法，該方法操作簡單，靈敏度高，特異性好。?

實現上述目的，本發明提供一種呋喃妥因檢測試劑盒，其包含的主要試劑有：發光標記物、熒光素標記物、標準品、質控品、分離試劑。?

所述的分離試劑是包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。?

所述的順磁性納米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基團的微珠，用于包被羊抗FITC單克隆抗體，其內芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有順磁性。?

所述的發光標記物是異魯米諾衍生物標記的呋喃妥因半抗原。所述的異魯米諾衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。?

所述的試劑盒還包括標準品，質控品和濃縮洗液。?

所述的熒光素標記物是FITC標記的呋喃妥因單克隆抗體。?

本發明還提供一種利用試劑盒檢測呋喃妥因的方法，包括下列步驟：?

1)分別吸取20μl-100μl標準品或樣本，然后加入20μl-100μl發光標記物，再加20μl-100μl熒光素標記物，充分混勻后，37℃溫育15min；?

2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150μl，混勻后?在37℃溫育5min；?

3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500μl沖洗復合物沉淀；?

4)上述清洗步驟重復2-4次；?

5)4)所得分離好的復合物直接放入測量暗箱，加入激發底物1和激發底物2，延遲3-5s后檢測發出的相對光強度(RLU)，樣本中的含量與RLU成一定比例關系，可以通過RLU集合標準曲線法計算呋喃妥因的濃度。?

所述的發光底物的主要成分是NaOH和H₂O₂。?