[發明專利]快速檢測淋球菌的熒光定量PCR試劑盒

無效

• 申請號: 201010592604.1
• 申請日: 2010-12-17
• 公開（公告）號: CN102108405A
• 公開（公告）日: 2011-06-29
• 發明（設計）人: 王業富;唐景峰;王維旭;楊敬鏡;汪曉莉
• 申請（專利權）人: 武漢百泰基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 黃瑞棠

1.一種快速檢測淋球菌的熒光定量PCR試劑盒，其特征在于：

由DNA裂解液、熒光定量PCR反應液、標準陽性模板PMD18-T-NG、陰性質控標準品組成；熒光定量PCR反應液含有淋球菌特異性引物對和熒光探針；

正向引物為5′-CTGATTTGGGTTCGAAAATCG-3′，

反向引物為5′-CCTTCKTTAGTACCGCTGAC-3′，

其中正向引物可向5’和3’端方向各延伸10個堿基，反向引物可向5’和3’端方向各延伸10個堿基；

熒光探針序列為5′-TCAAGAAGACCTCGGCA-3′，該熒光探針序列可向5’和3’端方向各延伸10個堿基，熒光探針為LNA型Taqman探針，5′端標記報告熒光基團FAM，3′端標記不發光的淬滅基團標記BHQ，可以大大減少背景噪音的干擾，標準陽性模板PMD18-T-NG是含有淋球菌高度保守基因-porA基因的109個堿基對的核苷酸片段構成的PMD18-T載體，該載體在大腸桿菌DH5α中增殖。

2.按權利要求1所述的PCR試劑盒，其特征在于DNA裂解液包含：

50mmol/L?NaOH，10mmol/L?Tris-HCl，pH?8.0，體積分數為1％Triton?X-100，體積分數為1％NP-40，0.5mmol/L?EDTA?pH?8.0。

3.按權利要求1所述的PCR試劑盒，其特征在于熒光定量PCR反應液包含：

PCR?10×buffer?5.0μl，10μmol/L的正向引物和反向引物各1.5μl，5μmol/L的熒光探針1.5μl，25mmol/L的MgCl212.5μl，10mmol/L的dNTPs?1.0μl，2.5U/μl的Taq?DNA聚合酶1.0μl，無菌雙蒸水26μl。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征是淋球菌標準陽性模板PMD18-T-NG包含的porA基因的核苷酸序列為：

CTGATTTGGGTTCGAAAATCGGCTTCAAAGGTCAAGAAGACCTCGGCAACGGCCTGAAAGCCATTTGGCAGTTGGAACAAAAAGCCTACGTCAGCGGTACTAACGAAGG。

5.按權利要求1所述的PCR試劑盒，其特征在于陰性質控標準品為：

無菌雙蒸水。