[發明專利]一種病毒樣顆粒手足口病疫苗及其制備方法

無效

• 申請號: 201010591372.8
• 申請日: 2010-12-16
• 公開（公告）號: CN102533572A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 馬占軍;陸家海;張定梅;楊東虎;陸杰
• 申請（專利權）人: 顧睞博(北京)科技有限公司
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/33;C12N7/04;A61K39/125;A61P31/14;C12R1/85
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種用于制備病毒樣顆粒的重組酵母菌，按照包括如下步驟的方法制備得到：將構建病毒樣顆粒所需的蛋白的編碼基因導入出發酵母菌，得到重組酵母菌。

2.根據權利要求1所述的重組酵母菌，其特征在于：所述編碼基因是通過重組表達載體導入所述出發酵母菌中的；所述重組表達載體按照如下方法得到：將所述編碼基因插入酵母表達載體的多克隆位點，得到所述重組表達載體。

3.根據權利要求1或2所述的重組酵母菌，其特征在于：所述酵母表達載體為pGAPZa-A；所述出發酵母菌為SMD1168。

4.根據權利要求1-3中任一所述的重組酵母菌，其特征在于：所述病毒樣顆粒為引起手足口病的病毒的病毒樣顆粒。

5.根據權利要求1-4中任一所述的重組酵母菌，其特征在于：所述引起手足口病的病毒為EV71；所述構建EV71病毒的病毒樣顆粒所需的蛋白的氨基酸序列如SEQID?NO：1和SEQ?ID?NO：3所示；所述重組表達載體為如下1)和2)所示：

1)所述重組表達載體按照如下方法得到：將所述SEQ?ID?NO：1所示蛋白的編碼基因插入所述酵母表達載體的多克隆位點，得到的重組表達載體；

2)所述重組表達載體按照如下方法得到：將所述SEQ?ID?NO：3所示蛋白的編碼基因插入所述酵母表達載體的多克隆位點，得到的重組表達載體；

和/或，所述SEQ?ID?NO：1所示蛋白的編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；所述SEQ?ID?NO：3所示蛋白的編碼基因的核苷酸序列如SEQID?NO：4所示。

6.一種制備病毒樣顆粒的方法，包括如下步驟：培養權利要求1-5中任一所述重組酵母菌，所述構建病毒樣顆粒所需的蛋白的編碼基因在所述重組酵母菌中表達，得到所述構建病毒樣顆粒所需的蛋白，所述構建病毒樣顆粒所需的蛋白進行自組裝，得到病毒樣顆粒。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述培養的溫度為27℃-33℃，具體為27℃、30℃或33℃；所述培養的pH值為4.5-5.5，具體為4.5或5.0或5.5；所述溶氧為50％-70％，具體為50％或60％或70％；

所述培養中使用的培養基按照如下方法配制：將YPD液體培養基和博萊霉素混合，得到所述培養基；YPD液體培養基和博萊霉素的配比為1ml∶(100μg-500μg)，具體為1ml∶100μg或1ml∶200μg或1ml∶500μg。

8.由權利要求6或7所述方法得到的病毒樣顆粒。

9.一種手足口病疫苗，其活性成分為權利要求8中所述病毒樣顆粒；或權利要求8中所述病毒樣顆粒在制備手足口病疫苗中的應用。

10.根據權利要求9所述的疫苗或應用，其特征在于：所述疫苗中包括佐劑；所述病毒樣顆粒和佐劑的配比為0.001g∶0.5g-0.005g?0.25g，具體為0.001g∶0.5g、0.003g∶0.15g或0.005g∶0.25g；

和/或，所述佐劑為AL(OH)₃佐劑。