[發明專利]氨(氨離子)的測定方法與氨(氨離子)診斷/測定試劑盒

無效

• 申請號: 201010584246.X
• 申請日: 2010-12-13
• 公開（公告）號: CN102539717A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N21/31;G01N21/33;C12Q1/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及醫學/食品檢驗測定技術領域，更具體地，本發明涉及氨(氨離子)診斷/測定方法及其試劑盒。?

背景技術

氨測定的方法有微量擴散法、離子交換法、酶法和氨電極法等。目前應用最多的方法是酶法和基于離子選擇電極的血氨測定儀分析法。?

擴散法是標本堿化后，釋放出NH₃，用酸滴定釋放出的氨，或用Nessler反應形成棕黃色碘化雙汞胺進行比色。這些方法需要堿化，內源性的氨形成造成影響，使其準確性和精密度受到影響，目前已很少應用；離子交換法比擴散法更準確，CV為8％～13％；離子選擇電極法是利用NH₃擴散到電極表面，引起電極的pH發生變化進行測定，該方法的CV為3.5％～4.8％，回收率高。結合具體實際，應以酶法測定為實用。?

檢索中國專利，僅查出87105593.7專利申請公開了一種血氨測定速凍杯，卻未發現比較理想的血氨測定方法。?

發明內容

[要解決的技術問題]?

本發明的目的是提供一種氨(氨離子)的測定方法。?

本發明的另一個目的是提供一種氨(氨離子)診斷/測定試劑盒。?

[技術方案]?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明的方法是一種采用雙倍擴增法(Double?Enhance?Method)、酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)與酶(偶)聯法(Couple?Reaction)的聯用技術，利用測定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處的吸光度變化測定氨(氨離子)的方法。?

本發明氨(氨離子)測定方法的的技術原理是根據下述鐵氧還蛋白亞硝酸還?原酶、硝酸還原酶、一氧化氮加雙氧酶的系列催化反應完成：?

氨+2水+6氧化型鐵氧還蛋白??鐵氧還蛋白亞硝酸還原酶

????????????????????????????亞硝酸+6還原型鐵氧還蛋白?

亞硝酸+水+輔酶??硝酸還原酶??硝酸+還原型輔酶?

2硝酸+輔酶??一氧化氮加雙氧酶??2一氧化氮+2氧+?

????????????????????????????????????還原型輔酶?

本發明的方法利用鐵氧還蛋白亞硝酸還原酶(ferredoxin-nitrite?reductase；EC1.7.7.1)酶(偶)聯硝酸還原酶(nitrate?reductase；EC?1.7.1.1；EC?1.7.1.2；EC1.7.99.4)、一氧化氮加雙氧酶(nitric?oxide?dioxygenase；EC?1.14.12.17)酶促反應比色終點法。鐵氧還蛋白亞硝酸還原酶酶解氨反應產生亞硝酸，再通過(偶)聯合硝酸還原酶、一氧化氮加雙氧酶的作用，最終二次(雙倍)將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度，這樣可以通過測量340nm處吸光度上升的程度，可以測算氨(氨離子)的濃度大小。?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明涉及一種氨(氨離子)的測定方法。該氨(氨離子)測定方法的步驟如下：?

A、樣品準備：?

A.1標準樣品的制備?

將一定量的氨鹽溶于水或緩沖液中，再將氨濃度調整到100微摩爾/升，得到的溶液作為標準樣品；?

A.2待測樣品的制備?

待測液體樣品直接測試，無須預處理；將一定量的待測固體樣品像制備標準樣品一樣溶于水或緩沖液中；?

A.3空白樣品?

所述的水或緩沖液作為空白樣品，其氨(氨離子)濃度為0微摩爾/升；?

B、試劑溶液的制備：?

分別移取或稱取緩沖液、穩定劑、輔酶、鐵氧還蛋白亞硝酸還原酶、硝酸還原酶、一氧化氮加雙氧酶、氧化型鐵氧還蛋白，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-2mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-100mmol/L；?