[發明專利]紅萍品種保存方法

無效

• 申請號: 201010583023.1
• 申請日: 2010-12-10
• 公開（公告）號: CN102119659A
• 公開（公告）日: 2011-07-13
• 發明（設計）人: 徐國忠;鄭向麗;葉花蘭;王俊宏;林永輝
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院農業生態研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于農業技術領域，具體涉及紅萍品種資源的保存方法，尤其涉及紅萍組培保存過程中溫度選擇的新方法。

背景技術

紅萍又名滿江紅，學名Azolla，是一種蕨藻共生的綠肥植物。由于紅萍不易形成孢子果，因此紅萍品種資源保存以其營養體為主，目前我們采用的方法是莖尖組培培養保存、溫室培養保存和網室培養保存。其中保存時間最長的為紅萍莖尖半固體培養保存，一次培養保存時間為3-4個月，這個時間仍然太短。現有紅萍品種資源保存工作量大，保存成本高。嚴重制約了紅萍利用的發展。

發明內容

本發明的目的是提供一種紅萍品種資源保存新方法，使紅萍品種資源的保存時間延長到1年，比原來紅萍品種資源保存的最長時間長8-9個月，從而減輕紅萍品種資源保存的工作量，節約保存成本。

發明人發現在低溫的條件下，能夠延長紅萍的保存時間，因此把原來保存的溫度20-25℃改為0-10℃，可大大延長其保存時間，又能夠不影響其存活。

本發明采用的技術方案是：

一種紅萍品種保存方法，所述的方法為：將用莖尖培養保存的無菌紅萍轉接至半固體培養基，在0～10℃溫度進行保存；所述用莖尖培養保存的無菌紅萍的培養方法為：切取0.8~1.2mm的紅萍莖尖，用0.01%HgCl₂浸泡10分鐘，用無菌水沖洗干凈，然后接到高壓滅菌過的液體培養基中，待長成萍體后，即為莖尖培養的無菌紅萍。

所述液體培養基中各成分的濃度為:CaSO₄.2H₂O(0.17g/L)、MgSO₄.7H₂O(0.41g/L)、KH₂PO₄(0.04g/L)、KCl(0.02g/L)、EDTA-Na₂(0.004g/L)、FeSO₄.7H₂O(0.003g/L)、H₃BO₃(0.0015g/L)_、Na₂MoO₄.2H₂O(0.0019g/L)、NaNO₃(0.06g/L)；其中Ca濃度為0.04g/L、Mg濃度為0.04g/L、P濃度為0.02g/L、K濃度為0.04g/L、Fe濃度為0.0005g/L、B濃度為0.0002g/L、Mo濃度為0.00015g/L、Na濃度為0.01g/L。首先配成上述濃度的液體培養液，調pH到6.0，經高壓滅菌即為液體培養基；液體培養基加入瓊脂配成半固體培養基；配成半固體培養基時瓊脂的用量為每升培養液中加入瓊脂5g。

所述液體培養液的pH值用稀HCl或稀NaOH調為6.0，其中稀HCl的濃度通常為?0.1~0.2mol/L,所述稀NaOH濃度通常為0.1~0.2mol/L

根據本發明方法保存的紅萍品種資源，保存的時間可達到12個月，比原來的保存3-4個月時間，延長了8-9個月，大大減輕紅萍品種資源保存的工作量，節約保存成本。

具體實施方式

實施例1：

一、材料：卡州萍3001

培養液配方見表1

表1??培養液配方

其中EDTA-Na₂為乙二胺四乙酸二鈉。配好的培養液用0.1mol/L的稀HCl調pH值到6.0，高壓滅菌鍋中進行高壓，121℃下滅菌40分鐘，即為高壓滅菌過的液體培養基。

二、步驟

1.?培養基制備：按照表1培養液配方配制培養液，然后按每升液體培養基中加入瓊脂5g的量加入瓊脂配成半固體培養基，裝入100ml的三角瓶中。

2.高壓滅菌：將裝好半固體培養基的三角瓶放入高壓滅菌鍋中進行高壓，121℃下滅菌40分鐘。

3.?接種：將用莖尖培養保存的無菌紅萍轉接至配好的半固體培養基中。其中，無菌紅萍的具體制作方法為：切取1mm左右大小的紅萍莖尖，用0.01%HgCl₂浸泡10分鐘，用無菌水沖洗干凈，然后接到高壓滅菌過的液體培養基，待長成萍體后，即為莖尖培養的無菌紅萍。

4.?培養保存：在溫度為2℃進行培養保存。

比較例1

材料和步驟同實施例1，所不同的是，在步驟4，培養保存在溫度20-25℃進行保存。

結果

紅萍培養保存的時間見表2。

表2??實施例1保存方法與對比例1保存方法的保存時間表