[發(fā)明專利]紅萍品種保存方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010583023.1
• 申請日: 2010-12-10
• 公開（公告）號: CN102119659A
• 公開（公告）日: 2011-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐國忠;鄭向麗;葉花蘭;王俊宏;林永輝
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及紅萍品種資源的保存方法，尤其涉及紅萍組培保存過程中溫度選擇的新方法。

背景技術(shù)

紅萍又名滿江紅，學(xué)名Azolla，是一種蕨藻共生的綠肥植物。由于紅萍不易形成孢子果，因此紅萍品種資源保存以其營養(yǎng)體為主，目前我們采用的方法是莖尖組培培養(yǎng)保存、溫室培養(yǎng)保存和網(wǎng)室培養(yǎng)保存。其中保存時間最長的為紅萍莖尖半固體培養(yǎng)保存，一次培養(yǎng)保存時間為3-4個月，這個時間仍然太短。現(xiàn)有紅萍品種資源保存工作量大，保存成本高。嚴(yán)重制約了紅萍利用的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種紅萍品種資源保存新方法，使紅萍品種資源的保存時間延長到1年，比原來紅萍品種資源保存的最長時間長8-9個月，從而減輕紅萍品種資源保存的工作量，節(jié)約保存成本。

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在低溫的條件下，能夠延長紅萍的保存時間，因此把原來保存的溫度20-25℃改為0-10℃，可大大延長其保存時間，又能夠不影響其存活。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種紅萍品種保存方法，所述的方法為：將用莖尖培養(yǎng)保存的無菌紅萍轉(zhuǎn)接至半固體培養(yǎng)基，在0～10℃溫度進(jìn)行保存；所述用莖尖培養(yǎng)保存的無菌紅萍的培養(yǎng)方法為：切取0.8~1.2mm的紅萍莖尖，用0.01%HgCl₂浸泡10分鐘，用無菌水沖洗干凈，然后接到高壓滅菌過的液體培養(yǎng)基中，待長成萍體后，即為莖尖培養(yǎng)的無菌紅萍。

所述液體培養(yǎng)基中各成分的濃度為:CaSO₄.2H₂O(0.17g/L)、MgSO₄.7H₂O(0.41g/L)、KH₂PO₄(0.04g/L)、KCl(0.02g/L)、EDTA-Na₂(0.004g/L)、FeSO₄.7H₂O(0.003g/L)、H₃BO₃(0.0015g/L)_、Na₂MoO₄.2H₂O(0.0019g/L)、NaNO₃(0.06g/L)；其中Ca濃度為0.04g/L、Mg濃度為0.04g/L、P濃度為0.02g/L、K濃度為0.04g/L、Fe濃度為0.0005g/L、B濃度為0.0002g/L、Mo濃度為0.00015g/L、Na濃度為0.01g/L。首先配成上述濃度的液體培養(yǎng)液，調(diào)pH到6.0，經(jīng)高壓滅菌即為液體培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基加入瓊脂配成半固體培養(yǎng)基；配成半固體培養(yǎng)基時瓊脂的用量為每升培養(yǎng)液中加入瓊脂5g。

所述液體培養(yǎng)液的pH值用稀HCl或稀NaOH調(diào)為6.0，其中稀HCl的濃度通常為?0.1~0.2mol/L,所述稀NaOH濃度通常為0.1~0.2mol/L

根據(jù)本發(fā)明方法保存的紅萍品種資源，保存的時間可達(dá)到12個月，比原來的保存3-4個月時間，延長了8-9個月，大大減輕紅萍品種資源保存的工作量，節(jié)約保存成本。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

一、材料：卡州萍3001

培養(yǎng)液配方見表1

表1??培養(yǎng)液配方

其中EDTA-Na₂為乙二胺四乙酸二鈉。配好的培養(yǎng)液用0.1mol/L的稀HCl調(diào)pH值到6.0，高壓滅菌鍋中進(jìn)行高壓，121℃下滅菌40分鐘，即為高壓滅菌過的液體培養(yǎng)基。

二、步驟

1.?培養(yǎng)基制備：按照表1培養(yǎng)液配方配制培養(yǎng)液，然后按每升液體培養(yǎng)基中加入瓊脂5g的量加入瓊脂配成半固體培養(yǎng)基，裝入100ml的三角瓶中。

2.高壓滅菌：將裝好半固體培養(yǎng)基的三角瓶放入高壓滅菌鍋中進(jìn)行高壓，121℃下滅菌40分鐘。

3.?接種：將用莖尖培養(yǎng)保存的無菌紅萍轉(zhuǎn)接至配好的半固體培養(yǎng)基中。其中，無菌紅萍的具體制作方法為：切取1mm左右大小的紅萍莖尖，用0.01%HgCl₂浸泡10分鐘，用無菌水沖洗干凈，然后接到高壓滅菌過的液體培養(yǎng)基，待長成萍體后，即為莖尖培養(yǎng)的無菌紅萍。

4.?培養(yǎng)保存：在溫度為2℃進(jìn)行培養(yǎng)保存。

比較例1

材料和步驟同實(shí)施例1，所不同的是，在步驟4，培養(yǎng)保存在溫度20-25℃進(jìn)行保存。

結(jié)果

紅萍培養(yǎng)保存的時間見表2。

表2??實(shí)施例1保存方法與對比例1保存方法的保存時間表