[發(fā)明專利]一種適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010579423.5
• 申請日: 2010-12-09
• 公開（公告）號: CN102068965A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 應(yīng)國清;崔國艷;易喻;王鴻;梅建鳳;陳建澍
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: B01J20/24
• 分類號: B01J20/24;B01J20/30;C07K1/22
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;俞慧

1.一種適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法，包括如下步驟：

(1)在攪拌下，將殼聚糖的乙酸溶液分散于液體石蠟中，在制孔劑環(huán)己烷和少許span?80存在下，形成殼聚糖微粒；然后在交聯(lián)劑戊二醛的作用下，殼聚糖微粒進一步交聯(lián)形成殼聚糖骨架；

(2)殼聚糖骨架先進行溶脹處理；然后在DMSO/NaOH混合液中，殼聚糖骨架上的羥基與環(huán)氧氯丙烷反應(yīng)，在殼聚糖骨架上引入環(huán)氧基，得到接枝后的殼聚糖骨架；

(3)將IDA/NaOH混合溶液加入接枝后的殼聚糖骨架，20～80℃溫度下反應(yīng)1～10h，抽濾即得所述的殼聚糖分離介質(zhì)；所述IDA/NaOH混合溶液中，IDA濃度為0.5～3mol/L，NaOH濃度為0.5～3.0mol/L。

2.如權(quán)利要求1所述的適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的步驟(1)具體如下：將殼聚糖溶解在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0～3.0％的醋酸溶液中配制得到濃度為0.01～0.05g/mL的殼聚糖溶液；在反應(yīng)容器中依次加入液體石蠟、環(huán)己烷和少許Span?80，攪拌30～60min后加入配制得到的殼聚糖溶液，加熱至20～80℃攪拌0.5～1.5h；然后加入戊二醛，調(diào)節(jié)pH至8～12，然后升溫至30～80℃，繼續(xù)反應(yīng)2～6h，趁熱抽濾、洗滌、干燥得到殼聚糖骨架；所述殼聚糖溶液與液體石蠟的投料體積比為1∶0.5～5，所述交聯(lián)劑戊二醛與殼聚糖氨基的摩爾比為1∶0.1～10，所述制孔劑環(huán)己烷與液體石蠟投料體積比為5～50∶100。

3.如權(quán)利要求2所述的適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的步驟(1)中，所述殼聚糖溶液與液體石蠟的投料體積比為1∶1～3；所述交聯(lián)劑戊二醛與殼聚糖氨基的摩爾比為1∶0.5～3；所述制孔劑環(huán)己烷與液體石蠟的投料體積比為10～30∶100。

4.如權(quán)利要求2所述的適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的步驟(1)中，加入配制得到的殼聚糖溶液后先加熱至50～60℃攪拌0.5～1.0h；然后加入戊二醛，調(diào)節(jié)pH至9～10，然后升溫至60～70℃，繼續(xù)反應(yīng)2.5～4h。

5.如權(quán)利要求1所述的適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)具體如下：稱取殼聚糖骨架，經(jīng)水充分溶脹后，依次用體積分?jǐn)?shù)為10％～100％梯度濃度的二甲基亞砜溶液清洗；向處理后的產(chǎn)物中加入DMSO/NaOH溶液和環(huán)氧氯丙烷，在20～80℃振蕩反應(yīng)1～10h，反應(yīng)結(jié)束后用蒸餾水清洗，直至清洗液中無環(huán)氧基檢出；所述DMSO/NaOH混合液由DMSO與0.1～1.0mol/L的NaOH水溶液按照體積比1∶0.1～10.0配制得到；所述環(huán)氧氯丙烷與DMSO/NaOH混合液的投料體積比為1～20∶100。

6.如權(quán)利要求5所述的適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中，所述DMSO/NaOH混合液由DMSO與0.1～1.0mol/L的NaOH水溶液按照體積比1∶0.5～2.0配制得到；所述環(huán)氧氯丙烷與DMSO/NaOH混合液的投料體積比為5～15∶100。

7.如權(quán)利要求5所述的適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中，在40～50℃振蕩反應(yīng)，反應(yīng)時間3～5h。

8.如權(quán)利要求1所述的適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法，其特征在于所述的步驟(3)中，反應(yīng)溫度為55～65℃，反應(yīng)時間為3～8h。