[發明專利]一種真核表達載體以及在制備抑制白血病細胞增殖藥物中的應用

無效

• 申請號: 201010576421.0
• 申請日: 2010-12-07
• 公開（公告）號: CN102080098A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發明（設計）人: 劉厚奇;孫擎;楊玲
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12N15/79
• 分類號: C12N15/79;C12N5/10;C07K19/00;C12P21/02;A61K38/00;A61K48/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種真核表達載體，以及該真核表達載體在制備抑制白血病細胞增殖藥物中的應用。

背景技術

白血病抑制因子(Leukemia?inhibitory?factor，LIF)作為的IL-6細胞因子家族的一員，能夠抑制白血病細胞，例如人HL-60、U937、小鼠M1系的增殖。然而，白血病細胞增長快速并對LIF感應能力差的特性，使得機體內有限的LIF無法有效抑制白血病細胞的生長[T.Maekawa，D.Metcalf，Clonalsuppression?of?HL60?and?U937?cells?by?recombinant?human?leukemia?inhibitoryfactor?in?combination?with?GM-CSF?or?G-CSF，Leukemia?3(1989)270-276；D.P.Gearing，N.M.Gough，J.A.King，D.J.Hilton，N.A.Nicola，R.J.Simpson，E.C.Nice，A.Kelso，D.Metcalf，Molecular?cloning?and?expression?of?cDNA?encoding?amurine?myeloid?leukaemia?inhibitory?factor(LIF)，EMBO?J?6(1987)3995-4002；T.Maekawa，D.Metcalf，D.P.Gearing，Enhanced?suppression?of?human?myeloidleukemic?cell?lines?by?combinations?of?IL-6，LIF，GM-CSF?and?G-CSF，Int?JCancer?45(1990)353-358.]。而外源性、非生理劑量的LIF對脂肪細胞、生殖細胞和內分泌細胞等正常細胞具有顯著的細胞毒性，同時干擾了細胞因子間的正常協調作用，所以LIF的藥用價值也不能得到有效地體現[D.Metcalf，N.A.Nicola，D.P.Gearing，Effects?of?injected?leukemia?inhibitory?factor?onhematopoietic?and?other?tissues?in?mice，Blood?76(1990)50-56.]。

LIF是一種多功能、作用廣泛的細胞因子。它的廣泛生物學效應是通過結合靶細胞膜上的LIF受體(LIFR)來實現的。LIFR包括兩個亞基，LIFRα(gp190)和LIFRβ(gp130)。其中，LIFRα含有1239個氨基酸，胞外區由789個氨基酸構成，跨膜區由26個疏水氨基酸組成，胞內去由238個氨基酸構成。LIFRα的胞內區共有三個功能域(Box1、Box2和Box3)，這一官能的主要作用結構為YXXQ(Y為酪氨酸，X為任意氨基酸，Q為谷氨酰胺)，是激活細胞內信號分子的必須序列，在LIF-LIFR的信號通路激活過程中，LIF首先與LIFRα結合，并使之與另一受體亞基β結合形成異源性二聚體，進而啟動細胞內信號轉導，引導胞外的信號轉入核內，調控特定基因的表達，使細胞產生一系列的生理或病理變化[Y.Zhang，T.Willson，D.Metcalf，D.Cary，D.J.Hilton，R.Clark，N.A.Nicola，The?box-1?region?of?the?leukemia?inhibitory?factor?receptoralpha-chain?cytoplasmic?domain?is?sufficient?for?hemopoietic?cell?proliferation?anddifferentiation，J?Biol?Chem?273(1998)34370-34383.]。