[發明專利]人參內生灰綠犁頭霉菌及利用其制備人參皂苷Rd的方法

有效

• 申請號: 201010571874.4
• 申請日: 2010-12-03
• 公開（公告）號: CN102080048A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發明（設計）人: 呂國忠;張薇;孫曉東
• 申請（專利權）人: 大連民族學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P33/20
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 劉曉琴

技術領域

本發明涉及一株人參內生真菌，灰綠犁頭霉菌Absidia?glauca(CGMCCNo.4316)，以及利用該菌專一性轉化底物人參皂苷Rb₁為人參皂苷Rd的方法。?

背景技術

人參皂苷Rd是一種很有應用前景的候選藥物，它具有特異性阻斷受體依賴性鈣離子通道的功能，在腎功能保護、調節免疫、抑制HeLa細胞生長、誘導COX22產生、防輻射方面具有其他單體人參皂苷所沒有的獨特作用；在鎮痛、神經保護作用方面，Rd相對于其他單體人參皂苷也較強。因此，人參皂苷Rd可開發成防輻射，治療心血管疾病、炎癥、創傷以及由損傷引起的體內外出血等方面的藥物。然而，由于人參皂苷Rd在人參屬植物中含量較低，而且結構復雜，化學合成至今尚未成功，目前只能通過從人參等藥用植物的根、莖、葉中提取，但其效率低，成本高，從而限制了Rd的深入研究和應用。因此，獲得大量、高純度的人參皂苷Rd具有特別重要的科學研究意義和實際應用價值。?

對于人參皂苷的轉化，若采用傳統的化學轉化法，其選擇性低，副產物多，而且容易對環境造成污染。相比較而言，生物轉化法具有高度專一性和無污染性等優勢，因此，具有很好的應用前景。Rd與Rb₁具有相同的糖苷配基，其結構差異僅在于C3和C20位上的糖基，而Rb₁在人參中的含量較高，因此，可以通過水解Rb₁去除其C-20位上的糖基而獲得，轉化途徑如附圖1所示。目前，很多研究者都在尋找能夠將Rb₁轉化成Rd的微生物或者是酶，然而，大多數微生物或酶都缺少高度的專一性，甚至會將Rd進一步轉化成F2、Rg3或Rh2，而生成Rd的效率很低。?

利用微生物來源的酶轉化主要人參皂苷生產人參皂苷Rd普遍存在的問題有：轉化過程中轉化產物不專一；作為轉化底物的主要人參皂苷濃度不能過高；底物對酶有抑制作用等。Kim等從70多株好氣菌中篩選到12株產生的酶均可將人參皂苷Rb₁轉化成人參皂苷Rd，底物質量濃度為0.47mg/mL；而能將人參皂苷Rb₁較完全轉化的3株細菌，均有Compound?K等副產物產生(Kim?M?K等，The?Journal?of?Microbiology，2005，43：456-462)。Son等利用Thermus?caldophilus?產生的β-葡萄糖苷酶，將人參皂苷Rb₁轉化成Rd，底物質量濃度為1mg/mL，溫度為75℃。但由于人參皂苷的抑制作用，該反應底物用人參總提取物替代時，反應時間比用純Rb₁延長30倍；當人參總提取物質量濃度達到4.2mg/mL時，人參皂苷Rd的產率從80％降低到12％(Son?J?W等Biotechnology?Letters，2008，30：713-716)。本發明人即試圖尋找新的方案，來實現人參皂苷Rd的工業化生產，滿足臨床需要，同時可解決人參、三七等常用中藥材的資源緊缺的問題。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種可用于生物轉化生產稀有人參皂苷Rd的微生物，以及使用該菌專一性轉化底物人參皂苷Rb₁生產Rd的方法。?

本發明的人參內生菌是發明人從人參中分離得到的一株真菌，經傳統方法鑒定為灰綠犁頭霉菌Absidia?glauca。?

上述本發明的灰綠犁頭霉菌已于2010年11月8日提交保藏，具體保藏信息如下：?

保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(ChinaGeneral?Microbiological?Culture?Center，CGMCC)；?

保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所；?

保藏日期：2010年11月08日；?

保藏編號：CGMCC?No.4316。?

本發明的所述的灰綠犁頭霉菌(CGMCC?No.4316)具有如下的特征：?

PDA上25℃菌落生長迅速，5天直徑達5cm，最適生長溫度25℃～31℃；菌落初呈白色，后變為灰綠色或藍綠色，最后呈暗橄欖色；孢囊梗單生或2～4輪生；囊托與孢囊梗間存在一個隔膜，孢囊孢子平滑，呈球形，直徑2.5～5μm(3μm)。?