[發(fā)明專利]一種具有免疫活性雙孢蘑菇多糖、制備方法及用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010571448.0
• 申請日: 2010-12-03
• 公開（公告）號: CN102070723A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發(fā)明（設計）人: 曹庸;葉婧;陳雪香;劉欣
• 申請（專利權）人: 曹庸
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00;A61P37/02;A23L1/28;A23L1/09
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技術領域

本發(fā)明涉及一種免疫活性多糖，具體地說，就是涉及一類具有免疫活性的雙孢蘑菇多糖及其制備方法和應用。

技術背景

雙孢蘑菇性平、味甘，能補脾益氣，能增強人體抗病能力，具有長久的食用史。是目前世界上人工栽培最廣泛、產(chǎn)量最高、消費量最大的食用菌。也是我國食用菌出口創(chuàng)匯最多的產(chǎn)品。據(jù)中國食用菌協(xié)會統(tǒng)計，2009年我國雙孢蘑菇產(chǎn)量達到2000萬噸，主要以蘑菇罐頭、蘑菇干片、鹽水蘑菇等加工產(chǎn)品出口。從蘑菇中可提取一種多糖類物質(zhì)(PS-K)，其具有抵抗人體病毒及抗癌作用，能增強小鼠腹腔吞噬細胞的吞噬功能，并隨著劑量的增高，胸腺指數(shù)、脾指數(shù)也有增高的趨勢，能增強機體的免疫功能。但目前雙孢蘑菇中的多糖成分及其抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)機制仍未完全清楚。

雙孢蘑菇的保健功效已被悠久的食用史所證實，但是其活性來源、活性與結構的關系卻進展緩慢。大量國內(nèi)外的研究表明，雙孢蘑菇中多糖類物質(zhì)具有顯著的生物活性，成為新藥開發(fā)的突破點。然而多糖的結構多樣性、復雜性使其結構鑒定、構象分析以及構效關系等方面的研究遠遠落后于同樣為大分子物質(zhì)的蛋白質(zhì)和核酸，因此開展對雙孢蘑菇多糖的研究，具有科研和現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就在于提供一種具有免疫活性的雙孢蘑菇多糖、制備方法及用途。

為實現(xiàn)所述目的，本發(fā)明采用下述技術方案：一種具有免疫活性的雙孢蘑菇多糖，由包括以下步驟的方法制得：

(1)將新鮮雙孢蘑菇30～70℃下烘干、粉碎；

(2)水浴法提取1～4h，液料比20mL∶1g～50mL∶1/g、溫度50～90℃；

(3)用乙醇對水浴提取物進行醇沉，料液與乙醇的重量比為100∶9～20；

(4)采用Sevag法對醇沉物進行脫蛋白處理3～7次，干燥得到粗多糖；

(5)粗多糖用陰離子交換填料進行離子交換柱層析，采用蒸餾水洗脫，冷凍干燥得到多糖ABPI；

(6)多糖ABPI用凝膠填料用蒸餾水洗脫，冷凍干燥，得到雙孢蘑菇多糖ABPIa。

步驟(3)中，乙醇的體積分數(shù)為65％～85％。

步驟(5)中，離子交換劑為D201、DEAE-52和CM52其中的一種。

步驟(6)中，凝膠劑為Sephadex?G-200、Sephadex?G-100、Bio-Gel-p-2、Bio-Gel-p-4、sepharose?2B、sepharose?4B、sephacryl?S100和sephacryl?S300其中的一種。

上述方法所的雙孢蘑菇多糖ABPIa經(jīng)HPGPC凝膠排阻色譜和萄聚糖凝膠電泳測得其分子量范圍在1000k?Da～1100k?Da內(nèi)；經(jīng)GC-MS測得ABPIa糖基組成由核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡糖糖、半乳糖組成的雜多糖，摩爾質(zhì)量比＝2.08∶4.61∶2.45∶22.25∶36.45∶89.22∶1.55。高碘酸氧化可以推斷ABP?Ia的糖苷鍵結構。ABP?Ia具有1→2，1→4位點的糖苷鍵結構，可能具有1→3位點的糖苷鍵結構，而幾乎不具有1→6位點的糖苷鍵結構。IR紅外光譜表明ABP?Ia具備了糖類化合物所應有的分子間和分子內(nèi)的氫鍵和C-H伸縮振動峰、C-H的變角振動峰，可以初步判斷這些組分均為糖類化合物，是α型吡喃多糖。AFM掃描可以看出ABP?Ia在5％時聚集成近似棒狀的螺旋結構，每個棒狀螺旋由多股糖鏈纏繞而成，且糖鏈可能具有較多分支，說明多糖的水溶液濃度會影響糖鏈的聚集程度，ABP?Ia在5‰水溶液的狀態(tài)下，糖鏈結構松散，以單糖鏈為單位自然分散，彎曲起伏，多糖鏈因糖苷鍵的結合方式差異，產(chǎn)生L型或D型的立體構型，可能導致糖鏈的支鏈延伸方向不同，從而造成糖鏈的彎曲轉折。

本發(fā)明所得雙孢蘑菇多糖具有免疫促進作用，可用于制備抗腫瘤藥，也可也用于提高免疫功能的食品和保健品。

具體實施方式

實施例1：

(一)、雙孢蘑菇多糖的制備：

(a)準備雙孢蘑菇1000g，于45℃下烘干、粉碎，加3000g蒸餾水，于75℃水浴提取2h，過濾，真空濃縮；

(b)80％乙醇醇沉，離心(4500r，15min)棄上清；

(e)Segva法脫蛋白6次；

(f)選用離子交換填料(D201、DEAE-52、CM52)進行離子交換柱層析得ABPI；