[發明專利]一種快速篩選泌酸菌的方法

有效

• 申請號: 201010569826.1
• 申請日: 2010-12-02
• 公開（公告）號: CN102061331A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 何興兵;林永慧;陳亮;胡文勇;肖竹平;田啟建;何瑤慶
• 申請（專利權）人: 吉首大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 汪旭東

技術領域

本發明涉及一種微生物快速分離方法，更具體的說是一種快速篩選泌酸菌的方法。

背景技術

微生物的篩選分離在微生物的基礎與應用中起著重要作用，目前，對微生物篩選的方法很多，如利用革蘭氏染色法篩選革蘭氏陽性或陰性菌，利用染料脫色法從自然界篩選能夠降解染料的微生物（譚國民，柳榮展等，白腐菌對染料廢水脫色及降解的研究，中國造紙學報，2003），利用脂肪粒計數法、蘇丹Ⅲ菌泥染色法、碳饑餓檢出法來篩選高產油脂微生物菌株（宋安東，馮沖等，生物油脂高產菌株篩選方法研究，微生物學報，2009），利用微板篩選法對植酸酶產生菌菌種篩選（楊平平等，植酸酶菌種篩選方法的研究，工業微生物，2004）。傳統的直接分離純化方法耗時費力成本高，嚴重影響了研究進度，快捷的微生篩選方法可為微生物的研究節約大量時間，降低勞動強度，可大大降低研究成本。

泌酸菌是指分泌酸性有機物的一類微生物的統稱，泌酸菌在實際生產中具有廣泛的應用，如利用微生物產酸作用實現造紙黑液酸析可以大大降低黑液COD與色度，利用醋酸菌生產醋酸，利用乳酸菌生產乳酸應用于食品、醫藥、農業與化工業，利用己酸菌產生己酸用于白酒的釀造，利用鈍齒棒桿菌生產L-精氨酸用于心血管疾病的防治，泌酸發酵細菌在其所產生的泌酸相中可以具有很強的產氫能力，等等，目前這些泌酸菌的篩選大多是針對于特定樣品進行稀釋之后培養活菌，然后進行單菌分離，再針對于具體研究的目標酸進行定量測試，最后獲得目標菌。但是該分離鑒定方法需要對分離的每一株菌都要進行測試，因此該分離鑒定方法存在成本高、周期長、勞動強度大的缺點。

發明內容

1．發明要解決的技術問題：

目前，泌酸菌的篩選大多是針對于特定樣品進行稀釋之后培養活菌，然后進行單菌分離，再針對于具體研究的目標酸進行定量測試，最后獲得目標菌。但是該分離鑒定方法需要對分離的每一個菌都要進行測試，因此該分離鑒定方法存在成本高、周期長、勞動強度大的缺點。針對于這一現狀，本發明提供了一種快速篩選泌酸菌的方法，可以快捷直觀的篩選出泌酸的菌種，經過本發明的快速篩選后，再對所篩選到的菌進行目標酸的定量測試，可以大大降低成本，縮短周期，降低勞動強度。

2．技術方案：

本發明的技術方案為：

一種快速篩選泌酸菌的方法，其包括以下步驟：

（1）首先以瓊脂和水溶苯胺藍為實驗材料，探索苯胺藍（C₃₇H₂₇N₃Na₂O₉S₃）完全脫色時所需要的時間，然后再根據總時間來劃分時間段，對不同時間段的苯胺藍溶液進行吸光度的測量，然后計算出吸附率；

（2）將已經褪色的瓊脂-苯胺藍溶液過濾獲得吸附染料的瓊脂條，將其置于蒸餾水中并以不同濃度的酸加入其中進行解吸，測量出在不同酸濃度的情況下，溶液的吸光值，據此計算解吸率；

（3）取不同真菌接種于苯胺藍-PDA培養基上，觀察藍色深度，根據藍色深淺判斷泌酸菌（真菌）分泌酸性有機物的強弱。

步驟（2）中將吸附染料的瓊脂條取出，置于與苯胺藍溶液等體積的蒸餾水中，加入0、0.05、0.01,?0.1,0.2ml濃鹽酸觀察解吸后溶液顏色與加入鹽酸量的關系。

步驟（3）中同時將幾種真菌進行液體發酵，來測定所得發酵液的pH值與培養基的顏色深度關系。

3．有益效果：

本發明提供了一種快速篩選泌酸菌的方法，該方法可以快捷直觀的篩選出分泌酸性有機物的菌種，篩選過程簡單易操作。與液體發酵相比，該方法具有直觀、快捷等優點。特別是進行土壤或水體微生物泌酸菌篩選時，可以不用單獨進行菌的分離而直接快捷地可以鑒定出泌酸菌。整個過程耗時較短，克服了表型表達不穩定、敏感性不高、測試項目多、費時費力等問題，為篩選泌酸菌及科研提供了極大地方便。

具體實施方式

以下通過實例進一步說明本發明。

實施例1

????實驗步驟：

1．取五只150ml的錐型瓶，分別標記為A,B,C,D,E,F,G?。分別稱取2g瓊脂置于五只錐形瓶中。

2．配制100mg/L苯胺藍溶液，每只錐形瓶量取100ml配制好的苯胺藍溶液，從加入苯胺藍時開始分別計時。

3．取不同時間段的溶液過濾，測定不同時間段苯胺藍溶液的吸光值以計算瓊脂的吸附率，計算公式：瓊脂吸附率=（初始苯胺藍溶液吸光值-吸附后濾液的吸光值）/初始苯胺藍溶液吸光值。結果如表一：

表一?不同時間段各組吸光值及吸附率