[發明專利]黃桿菌胞內酶提取和快速轉化甜菊糖為甜茶甙的方法

無效

• 申請號: 201010569609.2
• 申請日: 2010-12-02
• 公開（公告）號: CN102061324A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 陳育如;姜中玉;玄燕;張玉千;夏文靜
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.一種甜菊糖苷快速轉化為甜茶甙的方法，其特征在于，包括下述步驟：

（1）胞內酶提取：將黃桿菌活化，得到的活化菌液經4℃、12000?r/min離心12?min，棄去上清，收集菌體，將菌液采用高壓細胞破碎儀或表面活性劑對菌體進行破碎，將破碎后的菌液于4℃、8000?r/min離心10?min，去除沉淀，上清用pH?4-10的緩沖液定容至10?mL?~100?mL，即為初始胞內液；

（2）轉化：取初始胞內液加甜菊糖使其溶解制成甜菊糖轉化液；對甜菊糖進行轉化，獲得甜茶甙。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）所說的菌體重懸液冰浴時間為0.05?h~5?h；所說的高壓破碎采用的壓力為3000?KPa?~15000?KPa，重復破碎2~10次。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）所說的菌體重懸液冰浴時間為0.05?h~5?h；用表面活性劑對細胞進行破碎，表面活性劑是膽酸鈉、SDS、CTAB或Triton-100，表面活性劑的添加量為0.01%~10%(W/W)。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所說的甜菊糖是甜菊苷、萊鮑迪甙A、萊鮑迪甙或它們的混合物。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所說的甜菊糖轉化液是由甜菊糖直接加入經稀釋的初始胞內酶液制成，轉化液中甜菊糖的濃度為0.1~10%（W/W）。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所說的甜菊糖轉化液體系中加入抗生素。

7.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所說的抗生素是利福平或青霉素或氯霉素，添加的抗生素溶液的濃度為0.01%~0.1%(W/W)，需加入該濃度下抗生素的體積為0.01?mL~10?mL。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中初始胞內酶液的添加量為1%~100%(V/V)。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中轉化時間為1?h~48?h；轉化溫度為30℃~60℃；轉化體系的pH值為4.0~12.0。