[發明專利]3種葵花籽多糖及葵花籽水溶性多糖的提取、分離純化方法

有效

• 申請號: 201010569607.3
• 申請日: 2010-11-27
• 公開（公告）號: CN102086235A
• 公開（公告）日: 2011-06-08
• 發明（設計）人: 王文俠;宋春麗;李文娟
• 申請（專利權）人: 齊齊哈爾大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C12S3/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種以脫脂葵花籽粕為原料提取、分離純化水溶性多糖的方法，其特征包括以下步驟：

(a)采用浸提、離心除渣、酸沉除蛋白、堿中和的方法提取葵花籽粗多糖；

(b)對步驟(a)處理所得的物料進行超濾濃縮、酶法結合三氯乙酸(TCA)法除蛋白、脫色、醇沉、柱層析的方法分離純化葵花籽多糖；

2.權利要求1所述的提取方法，浸提工藝其特征在于：

溫度40～70℃(例如40～70℃，如約40℃)；液固比5～20∶1v/w(液固比指堿性亞硫酸氫鈉溶液體積與葵花籽粕的質量之比，亞硫酸氫鈉濃度以0.1％～2％w/v(例如，0.1％，0.2％，0.3％或0.5％w/w)存在；pH值7.5～10.0(例如，7.5，8.0，8.5或9，如約8.0)；浸提時間0.5～6h(例如，1，2，4，5或6h，如約5h)；

3.權利要求1所述的提取方法，離心除渣、酸沉除蛋白及堿中和工藝其特征在于：

(a)0.1～2mol/L鹽酸調節上清液pH至4.0～4.5后，3000～5000r/min離心10～30min；

(b)0.1～2mol/L氫氧化鈉調節上清液pH至7.0。

4.權利要求1所述的多糖分離方法，超濾工藝其特征在于：

超濾壓力為0.01～0.1Mpa(例如0.02～0.06MPa，如約0.05MPa)；溫度為10～40℃(例如20～30℃，如約25℃)。

5.權利要求1所述的多糖分離方法，酶法結合三氯乙酸(TCA)法除蛋白工藝其特征在于：

(a)堿性蛋白酶法除蛋白：溫度40～65℃，pH值7.5～9.0，酶添加量為1％～4.0％w/w，時間0.5～2h。

(b)TCA處理酶解液進一步除蛋白：TCA濃度以0.1％～2％w/w(例如，0.1％，0.5％，1.0％或1.5％w/w)存在；時間以0.5～3h(例如，0.5，1，2或3h)存在；

6.權利要求1所述的多糖分離方法，采用D296型樹脂對多糖進行脫色，其特征在于：

上樣量為0.5～10ml(例如，2，3，4或5ml)；洗脫液為蒸餾水；洗脫流速為0.1～2ml/min(例如，0.5，1，1.5或2ml/min)；

7.權利要求1所述的多糖純化方法，采用DEAE?Sepharose?Fast?Flow柱層析法分離葵花籽多糖，其工藝特征在于：

上樣量為0.5～10ml(例如，2，3，4或5ml)；洗脫流速為0.1～4ml/min(例如，0.5，1，1.5，2或3ml/min)；以蒸餾水、0.1～0.4mol/LNaCl溶液階段梯度洗脫；蒸餾水洗脫分離得到DPW組分，0.1～0.4mol/LNaCl溶液洗脫分離得到DPN1組分。

8.權利要求1所述的多糖純化方法，采用Sepharose?CL-6B柱層析法分離葵花籽多糖組分——DPW及DPN1，其工藝特征在于：

上樣量為0.1～5ml(例如，0.1，0.5，1或5ml)；洗脫流速為0.1～2ml/min(例如，0.1，0.5，1或2ml/min)；洗脫液為0.1mol/L?NaCl溶液；分離得到三個糖組分，其中DPW為單一組分，分子量小于10KD。DPN1含有兩個組分，分別為DPN1-S1和DPN1-S2，DPN1-S1分子量約為37KD，DPN1-S2分子量小于10KD。

9.利用前述權利要求的方法獲得的三種葵花籽水溶性多糖。