[發明專利]微生物轉化制備R-4-氯-3-羥基丁酸酯和S-3-羥基丁內酯及菌株

有效

• 申請號: 201010567740.5
• 申請日: 2010-11-30
• 公開（公告）號: CN102168036A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: 汪釗;鄭建永;應向賢;章銀軍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P7/62;C12R1/11
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.巨大芽孢桿菌(Bacillus?megaterium)WZ009，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學，430072，保藏編號：CCTCCNO：M?2010171，保藏日期：2010年7月8日。

2.如權利要求1所述的巨大芽孢桿菌WZ009在微生物轉化制備R-4-氯-3-羥基丁酸酯和S-3-羥基丁內酯中的應用。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述應用為：以式(I)所示的外消旋4-氯-3-羥基丁酸酯為底物，以巨大芽孢桿菌WZ009含酶菌體細胞為催化劑，在pH6.5～7.5反應體系中，于20～50℃下反應1～24h，反應結束后反應液經分離純化得到式(II)所示的R-4-氯-3-羥基丁酸酯和S-3-羥基丁內酯；

式(I)、(II)中，R為C1～C4的烷基。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述反應在pH6.5～7.5的磷酸鹽緩沖液中進行。

5.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述反應在水/正己烷兩相反應體系中進行，水和正己烷體積比為1∶1。

6.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述反應以蒸餾水為反應溶劑，反應過程中用0.01M～0.2M氫氧化鈉或氨水滴定調控反應體系保持為pH7.0±0.2。

7.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述底物為外消旋4-氯-3-羥基丁酸甲酯或外消旋4-氯-3-羥基丁酸乙酯。

8.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述反應體系中：底物初始濃度為10～200mmol/L，催化劑為巨大芽孢桿菌WZ009凍干菌粉、添加量為10～100g/L。

9.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述反應在25～35℃、搖床轉速100～200r/min下進行，反應時間10～24h。

10.如權利要求3所述的應用，其特征在于：所述底物為外消旋4-氯-3-羥基丁酸乙酯，所述分離純化方法如下：反應結束后，離心去除菌體，取上清液用等體積乙酸乙酯萃取分離，得到含有R-4-氯-3-羥基丁酸乙酯和S-3-羥基丁內酯的有機相，無水硫酸鈉干燥，過濾后取濾液進行減壓蒸餾，先除去溶劑，收集90～100℃(5mmHg)餾分得到R-4-氯-3-羥基丁酸乙酯，收集130～140℃(5mmHg)餾分得到S-3-羥基丁內酯。