[發明專利]一種HIV-1脂質體疫苗

無效

• 申請號: 201010567682.6
• 申請日: 2010-12-01
• 公開（公告）號: CN102485273A
• 公開（公告）日: 2012-06-06
• 發明（設計）人: 陳妍;張勇;董慶光;孔維
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61K39/21
• 分類號: A61K39/21;A61K9/127;A61K47/48;A61P31/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物預防醫藥領域，具體涉及一種預防艾滋病的HIV-1脂質體疫苗的制備。

背景技術

艾滋病是全球所面臨的最重大挑戰之一，嚴重危害社會進步與經濟增長，已造成6000多萬人被感染，其中3000萬人已經死亡，目前存活的感染者約為3320萬，其中90％以上的病例發生在發展中國家。

至今為止，在各國政府與國際組織強有力的支持下，世界上先后開展了100多個臨床試驗，但尚未有一個成功上市的艾滋病疫苗。艾滋病疫苗研制困難的一個主要原因是由于艾滋病病毒的特殊性，即HIV-1具有高度的變異性。以往的疫苗所選擇的抗原表位主要是自然感染中的優勢抗原表位，而這些抗原表位是HIV-1中變異頻率最高的位點。因此，以這些抗原構建的疫苗誘導出的抗體具有延遲性，無法中和已經發生突變的HIV-1。通過保守免疫原設計來誘導具有廣譜保護作用新疫苗是解決現有艾滋病疫苗研究中所存在的問題一個重要研究方向。

高度保守的HIV-1?gp41?MPER被認為是最具潛力的中和抗體設計靶點。目前為止分離得到的五個廣泛中和抗體有三個(2F5，4E10和Z13抗體)是識別該區域的，其中4E10能以較低的濃度中和HIV-1原始病毒株在內22株病毒株的全部亞型病毒，2F5可中和大約67％左右的病毒。但是，無論在真核還是原核表達系統表達gp41或截短的gp41片段作為抗原時，由于獲得的蛋白溶解性較差，很難產生相應的抗體。

發明內容

本發明的目的是提供了一種用于預防艾滋病的HIV-1脂質體疫苗。

本發明將HIV-1?gP41的MPER段較保守的抗原核心表位共價偶聯到脂質體表面，模擬HIV病毒env的天然狀態，同時在抗原序列中加入通用的輔助性T細胞表位，通過B、T細胞雙信號識別，有助于增強機體對抗原的免疫應答，并能產生廣譜的保護作用。

其中HIV-1?gP41的MPER段較保守的抗原核心表位包括但不限于4E10和/或2F5所識別的核心表位，抗原序列中加入通用的輔助性T細胞表位包括但不限于破傷風毒素830-843序列和/或口蹄疫病毒VPI上200-213序列。

經豚鼠免疫實驗，檢測到較高滴度的針對HIV-1?gP41的MPER的抗體，并具有一定的中和活性。

附圖說明

圖1為本發明脂質體與抗原表位肽共價偶聯反應示意圖。馬來酰亞胺活化的磷脂在PH中性條件下與抗原表位肽的巰基發生邁克爾加成，從而將脂質體與抗原偶聯。

具體實施方式

下面結合實例對本發明進一步說明。

實施例1

抗原表位的設計

選取HIV-1?gp41?MPER上的4E10和/或2F5識別表位作為B細胞表位，加入通用T細胞輔助表位，中間以6-氨基己酸連接。

ELLELDKWASL-Ahx-QYIKANSKFIGITEC(P11)；

ELLELDKWASL-Ahx-AKFVAAWTLKAAAC(P12)；

SLNWFNITNWL-Ahx-QYIKANSKFIGITEC(P21)；

SLNWFNITNWL-Ahx-AKFVAAWTLKAAAC(P22)；

NEQELLELDKWASLWNWFNITNWLWYIK-Ahx-QYIKANSKFIGITEC(P31)；

NEQELLELDKWASLWNWFNITNWLWYIK-Ahx-AKFVAAWTLKAAAC(P32)。

實施例2

HIV-1脂質體疫苗的制備

利用薄膜分散法、反相蒸發法、乙醇注入法、凍干重建法等常用脂質體制備方法制備空白脂質體，脂質體膜材中加入馬來酰亞胺活化的磷脂或其他脂溶性物質。在PH中性條件下與抗原表位肽的巰基發生邁克爾加成，從而將脂質體與抗原偶聯，反應原理如圖1所示。以二油脂酰乙酰膽堿∶膽固醇∶心磷脂∶馬來酰亞胺活化磷脂酰乙醇胺(POPC∶Chol∶CL∶MPB-PE)＝8∶10∶1∶1(摩爾比)制備脂質體，將P11加入上述空白脂質體，P11∶脂類的重量比為1∶20，pH?6.6～6.7、4℃攪拌15h得P11脂質體疫苗(Liposome?P11)。相同方法制備P12脂質體疫苗(Liposome?P12)。GFC、RP-HPLC檢測偶聯率，結果顯示約50％的Pr偶聯到脂質體上。

實施例3

HIV-1脂質體疫苗的豚鼠免疫實驗