[發(fā)明專利]高產甘氨酸菌株的篩選及其在腈類化合物轉化中的應用

有效

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• 申請日: 2010-12-01
• 公開（公告）號: CN102161972A
• 公開（公告）日: 2011-08-24
• 發(fā)明（設計）人: 許正宏;張曉梅;竇文芳;許泓瑜;龔勁松;陸震鳴;史勁松;陳敬華
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P13/04;C12P7/40
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.高產甘氨酸菌株的篩選及其在腈類化合物轉化中的應用，其特征在于：采集生產腈類化合物的化工廠廠房周圍的土壤樣品，在甘氨腈為唯一氮源并添加溴百里香酚藍的固體初篩培養(yǎng)基進行篩選，獲得一株高產甘氨酸菌株尖孢鐮孢H3(Fusarium?oxysporum)。對該菌株進行培養(yǎng)，并以甘氨腈為底物進行甘氨酸轉化。該菌株還可將其它腈類化合物轉化為相應的酸。

2.根據權利要求1所述的高產甘氨酸菌株的篩選，其特征在于使用的篩選土樣為腈類化合物的化工廠廠房周圍的土壤樣品。

3.根據權利要求1所述的高產甘氨酸菌株的篩選，其特征在于使用的固體初篩培養(yǎng)基是以甘氨腈為唯一氮源并添加了溴百里香酚藍，其甘氨腈添加量為0.1g/L～2.0g/L、溴百里香酚藍0.05～0.5g/L。

4.根據權利要求1所述的高產甘氨酸菌株的篩選，其特征在于使用的固體初篩培養(yǎng)基是以甘氨腈為唯一氮源并添加了溴百里香酚藍，還包括了適量的葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、硫酸亞鐵、氯化鈣、氯化鈉、瓊脂。

5.根據權利要求1所述的高產甘氨酸菌株的篩選，其特征在于將權利要求2所述的土樣制成土壤懸液，取適量懸液傾注于權利要求3所述的固體初篩培養(yǎng)基，混勻并培養(yǎng)3-5d，挑取產生藍色變色圈的的單菌落，轉接至新鮮的培養(yǎng)基劃線分離，轉接3-5代，獲得純培養(yǎng)菌株。

6.根據權利要求1所述的一株高產甘氨酸菌株，其特征在于該菌株為尖孢鐮孢H3(Fusarium?oxysporum)，現保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.3829.但權利要求1所述的高產甘氨酸菌株，不限于尖孢鐮孢H3(Fusarium?oxysporum)。

7.根據權利要求1所述的尖孢鐮孢(Fusarium?oxysporum?H3)的培養(yǎng)，其特征在于：

(1)培養(yǎng)基：甘油10-20g/L，酵母膏1.0-10g/L，蛋白胨1.0-10g/L，硫酸鎂0.1-0.5g/L，磷酸二氫鉀1.0-5.0g/L，氯化鈉0.5-1.0g/L，硫酸亞鐵0.01-0.1g/L，己內酰胺0.5-1.0g/L，pH?5.0-8.0；

(2)培養(yǎng)溫度25-45℃，培養(yǎng)時間2-6d。

8.根據權利要求1所述的以甘氨腈為底物進行甘氨酸轉化的方法，其特征在于：

(1)底物溶液：配制5-100g/L的甘氨腈溶液，用0.5-5.0M的氫氧化鈉或鹽酸溶液調節(jié)pH至5.0-9.0；

(2)菌體收集：根據權利要求7所述的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法進行菌體培養(yǎng)，以6000-15000rpm離心5-20min，以收集經培養(yǎng)得到的菌體，用0.01-0.5M，pH?6.0-8.0的磷酸緩沖液洗滌菌體2-4次。

(3)轉化：將菌體重新懸浮于上述緩沖液中，并與底物溶液混勻，反應pH保持在6.0-8.0，反應溫度保持在20-60℃，攪拌轉速為50-250rpm，反應時間6-48h。

9.根據權利要求1所述的尖孢鐮孢(Fusarium?oxysporum?H3)還可將其它腈類化合物轉化為相應的羧酸。