[發明專利]一株高產L-脯氨酸短波單胞桿菌(JNPP-1)的篩選及應用

有效

• 申請號: 201010567114.6
• 申請日: 2010-12-01
• 公開（公告）號: CN102127515A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發明（設計）人: 許正宏;竇文芳;張曉梅;許泓瑜;陸震鳴;趙世杰;陳敬華;史勁松
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P13/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一株高產L-脯氨酸的菌株的篩選及其應用，其特征在于：采集自國內化工廠廠房周圍的土壤樣品，篩選氧化酶反應陽性的菌株進行發酵驗證。獲得一株L-脯氨酸的菌株缺陷短波單胞桿菌(Brevundimonas?sp.)，編號JNPP-1，該菌株在適宜條件下可發酵生產L-脯氨酸。

2.如權利要求1的缺陷短波單胞桿菌(Brevundimonas?sp.)JNPP-1，其分離篩選條件：稱取1.0-2.0g土樣于250mL三角瓶中，用10-50mL無菌水懸浮，然后置于水浴鍋中，60℃處理10min，冷卻后進行梯度稀釋，取0.2mL稀釋液涂布于肉湯固體平板上，30-40℃培養24-36h后，挑選氧化酶反應陽性的菌株進行發酵驗證。

3.如權利要求1的缺陷短波單胞桿菌(Brevundimonas?sp.)JNPP-1，其篩選培養基：葡萄糖50-70g/L，NH₄Cl?20-30g/L；K₂HPO₄?0.1-5.0g/L；MgSO₄?0.1-5g/L；ZnSO₄?0.01-0.10g/L；MnSO₄?0.01-0.10g/L；谷氨酸鈉40-60g/L；生物素50-200μg/L；硫胺素50-200μg/L；瓊脂20g/L。

4.如權利要求1的缺陷短波單胞桿菌(Brevundimonas?sp.)JNPP-1，其形態為短桿狀，在LB固體培養基上菌落圓形、表面光滑、菌苔濕潤、不透明、顏色灰白色；單個、成對或短鏈狀排列，單側鞭毛，無芽孢。

5.如權利要求1所述的一株高產L-脯氨酸的菌株，其特征在于該菌株為缺陷短波單胞桿菌(Brevundimonassp.)，編號JNPP-1，該菌株保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏號為CGMCCNo.3828。

6.如權利要求1的缺陷短波單胞桿菌(Brevundimonas?sp.)JNPP-1，其發酵培養基為：碳源50-150g/L；有機氮源6-30g/L；(NH₄)₂SO₄?20-30g/L；K₂HPO₄?0.1-5.0g/L；MgSO₄?0.1-5g/L；ZnSO₄?0.01-0.10g/L；MnSO₄?0.01-0.10g/L；谷氨酸鈉40-60g/L；生物素50-200μg/L；硫胺素50-200μg/L；pH?6.5-7.4，115℃高壓蒸汽下滅菌20min。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的碳源選自葡萄糖，蔗糖，麥芽糖，糖蜜的一種或兩種；所述的有機氮源選自玉米漿，蛋白胨，酵母粉中的一種或兩種。

8.如權利要求1的缺陷短波單胞桿菌(Brevundimonas?sp.)JNPP-1，其發酵生產L-脯氨酸的條件：250mL三角瓶裝20-60mL的發酵培養基，接種量為5-10％(w/w)，培養溫度30-40℃，搖床轉速90-200r/min，發酵時間72-84h；或按發酵罐容積的40-80％投入所述的發酵培養基，以0.07-0.1MPa滅菌30min，冷卻至30-40℃，接種量為5-10％(w/w)，培養溫度為30-35℃，通氣量為1∶0.5-2vvm，發酵罐的攪拌轉速為200-600r/min；發酵時間72-84h。

9.如權利要求1的缺陷短波單胞桿菌(Brevundimonas?sp.)JNPP-1作為生產L-脯氨酸的用途。