[發明專利]一種鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法

有效

• 申請號: 201010565405.1
• 申請日: 2010-11-30
• 公開（公告）號: CN102061330A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 張秀榮;王林海;黎冬華;張艷欣;危文亮
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 胡建平

1.一種鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)接種用菌株的培養：在含經過滅菌的PDA培養基的培養皿上接種菜豆殼球孢菌菌絲或尖孢鐮刀菌芝麻專化型菌菌絲，密封黑暗培養至形成菌落，然后將其制得菌餅，備用；

(2)種子預處理：選用健康飽滿的芝麻種子，滅菌備用；

(3)接種：在培養瓶中加入滅菌培養基，鋪放無菌濾紙，添加無菌水，并趕出氣泡，然后沿濾紙邊緣均勻擺放步驟(2)中經過滅菌處理的芝麻無菌種子，再在濾紙中央接種步驟(1)培養制得的菌餅，密閉黑暗培養；

(4)致病性調查：調查培養瓶中各個發芽種子的發病情況，并根據發病程度將發病情況劃分為不同的發病等級，該發病等級數值越大，發病程度越嚴重；

(5)致病性評價：計算每個菌株的致病指數，致病指數的計算公式如下，該致病指數數值越大表明該病原菌的致病性越強：

致病指數＝∑(發病等級×相應發病芽數)/總芽數。

2.根據權利要求1所述的鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：所述步驟(1)的具體步驟為：在含經過滅菌的PDA培養基的培養皿上接種菜豆殼球孢菌菌絲或尖孢鐮刀菌芝麻專化型菌菌絲，用Parafilm膜封口，然后于生化培養箱中28～30℃黑暗培養5～7d，所述PDA培養基的組成為：每升培養基中含200g去皮馬鈴薯濾液、葡萄糖15g、瓊脂12g，所述PDA培養基的滅菌方式為高溫高壓滅菌。

3.根據權利要求1所述的鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：步驟(2)中所述種子滅菌的方式為將種子置于重量百分比濃度為0.1％的升汞水溶液中浸泡4～5min，并在期間搖晃數次。

4.根據權利要求1所述的鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的培養基為2％瓊脂(w/v)，所述培養基的滅菌方式為高溫高壓滅菌。

5.根據權利要求1所述的鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：步驟(1)使用菜豆殼球孢菌時，步驟(3)所述的接種培養為28～30℃密封黑暗培養4～5d；步驟(1)使用尖孢鐮刀菌芝麻專化型菌時，步驟(3)所述的接種培養為28～30℃密封黑暗培養8～10d。

6.根據權利要求1所述的鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：所述步驟(3)的具體步驟為：在直徑為60mm～70mm的培養瓶中，加入滅菌培養基，鋪放無菌濾紙，添加無菌水，并趕出氣泡，然后沿濾紙邊緣均勻擺放20～30枚步驟(2)中經過滅菌處理的無菌芝麻種子，再在濾紙中央接種直徑為0.5cm～1cm的步驟(1)培養得到的菌餅，密閉黑暗培養。

7.根據權利要求1所述的鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：在進行步驟(3)之前，將步驟(3)重復進行至少2次。

8.根據權利要求7所述的鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：所述致病指數由每次實驗的致病指數平均而得。

9.根據權利要求1所述的鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：步驟(1)使用菜豆殼球孢菌時，所述步驟(4)中根據如下分級標準將發病等級劃分為6級，其中感染莖點枯病的芝麻芽或根的褐色部位多質地濕潤：

0級：無病菌侵染癥狀；

1級：根系變褐范圍≤1/3；

2級：根系變褐范圍為1/3～2/3之間；

3級：根系變褐范圍為2/3至整個根系變褐；

4級：根系全部變褐，根頸部感病且芽有1/2及1/2以下變褐；

5級：根系全部變褐，根頸部感病且芽有1/2以上變褐，甚至出現腐爛現象。

10.根據權利要求1所述的鑒定芝麻莖點枯病和枯萎病病原菌致病性的方法，其特征在于：步驟(1)使用尖孢鐮刀菌芝麻專化型菌時，所述步驟(4)中根據如下分級標準將發病等級劃分為6級，其中感染枯萎病的芝麻芽或根的褐色部位多質地干燥：

0級：無病菌侵染癥狀；

1級：根系變褐范圍≤1/3；

2級：根系變褐范圍為1/3～2/3之間；

3級：根系變褐范圍為2/3至整個根系變褐；

4級：根系全部變褐，根頸部感病且芽有1/2及1/2以下變褐；

5級：根系全部變褐，根頸部感病且芽有1/2以上變褐，甚至出現腐爛現象。