[發明專利]高純度羥基積雪草苷及積雪草苷B的制備方法

無效

• 申請號: 201010558562.X
• 申請日: 2010-11-24
• 公開（公告）號: CN102477063A
• 公開（公告）日: 2012-05-30
• 發明（設計）人: 邵燕;陳云艷;孔德云;翁小香;周靖;歐陽丹薇;呂峰;高雯;張靜;成亮
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 上海金盛協力知識產權代理有限公司 31242
• 代理人: 解文霞

技術領域

本發明涉及羥基積雪草苷與其同分異構體積雪草苷B的提純方法技術領域。

背景技術

積雪草Centella?asiatica(L.)Urban.為傘形科積雪草屬植物積雪草的干燥全草，始載于《神農本草經》，味苦、寒。主大熱，惡瘡，癰疽，身熱，被列為中品。積雪草為2010年版《中國藥典》收載的常用中藥，具有清熱利濕、解毒消腫的功效，臨床上多用于治療跌打損傷、皮膚病，同時用于傳染性肝炎、流行性腦脊髓膜炎、急性腎小球腎炎等。我國應用積雪草外用及內服治療疾病已有兩千年的歷史，南非、印度、東南亞等許多國家和地區也將其作為傳統藥物應用。積雪草主要的化學成份包括三萜類、多炔烯類、揮發油類以及其他成份。

積雪草總苷為從積雪草的全草中提取分離得到的有效部位，含有多種三萜類化合物，主要包括積雪草苷、羥基積雪草苷及其同分異構體積雪草苷B。具有促進創傷愈合作用，臨床上多用于治療手術創傷、燒傷、外傷和疤痕疙瘩等。

對于積雪草總苷中有關成分的HPLC含量測定已有的相關報道，均是在一般HPLC條件下進行測定，一般的甲醇-水或乙腈-水系統的流動相均無法有效分離羥基積雪草苷與其同分異構體積雪草苷B，羥基積雪草苷與其同分異構體積雪草苷B均為一個混合物的峰。

環糊精流動相添加劑法簡介：環糊精流動相添加劑法是將環糊精添加于流動相中。β-環糊精具有特殊的分子結構，即呈閉合筒狀結構。β-環糊精是由七個D-(+)-吡喃葡萄糖單元通過α-1，4糖苷鍵相結合，外部是親水性的表面，內部則是一個具有一定尺寸的手性疏水管腔，β-環糊精這種獨特的內疏水、外親水結構不僅使其在模擬酶、手性分離、主-客體化學、分子識別、光譜探針等領域顯示了重要的理論價值，更在醫藥、食品、化妝品、環境保護等領域顯示出重要的實用價值，特別是用于手性分離領域。但未見將環糊精包合物中的環糊精去除而對標準品進行提純的相關文獻報道。

發明內容

本發明的目的就是解決現有HPLC條件下無法分離出羥基積雪草苷與其同分異構體積雪草苷B的上述缺陷，提供一種簡便易行的分離高純度羥基積雪草苷及其同分異構體積雪草苷B的方法。

本發明通過制備型高效液相色譜儀，采用流動相環糊精添加劑法分別收集得到羥基積雪草苷的同分異構體積雪草苷B與羥基積雪草苷環糊精包合物的固體樣品，即環糊精與標準品的包合物；然后通過去除環糊精包合物中的環糊精對標準品進行提純即得到液相色譜分析用高純度羥基積雪草苷及其同分異構體積雪草苷B。

本發明采取的技術方案如下：

高純度羥基積雪草苷及積雪草苷B的制備方法，該方法是通過制備型高效液相色譜儀，流動相內添加環糊精，根據色譜峰分別采集得到兩種收集液，將兩種收集液分別回收溶劑后通過萃取去除環糊精，即得積雪草苷B與羥基積雪草苷的標準品。

上述的流動相優選乙腈-環糊精水溶液系統，環糊精水溶液的濃度范圍優選在2-8mmol/L，最優選2mmol/L。

上述的萃取步驟中，優選丁醇、戊醇、乙酸乙酯等作為有機相，最優選的是正丁醇，正丁醇作為有機相對樣品的溶解性能相對最好；有機相與水相的比例在1∶100～100∶1范圍之間選用，其中有機相與水相的比例優選范圍為4∶1-1∶4，最優選范圍為2∶1；兩種收集液分別回收溶劑后得白色粉末，白色粉末樣品量與有機相、水相的總量的比例(mg/ml)在1∶100～100∶1范圍之間選用，其中優選范圍為10∶1；對樣品進行萃取次數為1～10次，優選萃取次數為1次，分層得到有機相，將有機相回收溶劑后即得積雪草苷B與羥基積雪草苷的標準品。

本發明的有益效果：

本發明在制備型高效液相色譜分析方法基礎上利用環糊精流動相添加劑法分離出積雪草苷B與羥基積雪草苷的環糊精包合物，然后通過萃取去除環糊精得到液相色譜分析用高純度羥基積雪草苷及其同分異構體積雪草苷B。該方法價廉易行，不需特殊分析柱，就分離提純出了積雪草苷B與羥基積雪草苷，相對于現有技術具有很大的進步和優勢。

具體實施方式

以下實施例是為了更好的說明本發明而非用來限制本發明。

實施例1-12

1.制備：(送樣樣品為積雪草總苷原料)