[發明專利]分子伴侶功能的人肌酸激酶單鏈抗體

有效

• 申請號: 201010556989.6
• 申請日: 2010-11-24
• 公開（公告）號: CN102477096A
• 公開（公告）日: 2012-05-30
• 發明（設計）人: 李森
• 申請（專利權）人: 北京師范大學
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/13;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;A61K39/395
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技術領域

本發明涉及抗體的制備。具體而言，本發明公開了2個單鏈抗體，這些抗體是人肌酸激酶的分子伴侶。本發明還涉及人肌酸激酶的分子伴侶的制備過程。本發明的單鏈抗體具有促進肌酸激酶正確折疊的作用，本發明的抗體可以用于人肌酸激酶藥物的生產過程中，在制藥領域具有一定的應用價值。

背景技術

肌酸激酶(Creatine?Kinase，CK)通常存在于動物的肌肉、心臟以及腦等組織的胞漿和線粒體中，是一個與細胞內能量轉移、肌肉收縮、ATP再生有直接關系的重要激酶[Kuby?S，Noltman?E.Creatine?kinase.The?Enzymes，1962，6：515-6030.Alan?C，Mcluaghin.The?interaction?of?8-Anilino-1-naphthalen-esulfonate?with?creatine?kinase.The?Journal?of?Biological?Chemistry，1974，249(5)：1445-1452.]，它可逆地催化肌酸與ATP-Mg²⁺之間的轉磷酰基反應。肌酸激酶屬于磷酸原激酶大家族中的一員，存在于ATP快速再生的細胞中，在離子跨膜運輸、細胞吞噬作用、糖酵解調控、腦突觸神經傳遞的釋放中起著重要作用[Theo?Wallinann，Malus?Wyss，Dieter?Brdicaka?Intracellular?comparemention.structure?and?function?of?creatine?kinase：isoenzymes?in?tissues?with?high?and?fluctuating?energy?demands：the?phosphocreatine?circuit’for?cellular?energy?homeostasis.Biochem?J，1992，281(1)：21-40.]。

肌酸激酶的同功酶在臨床診斷中有十分重要的意義[Seraydrarian?M?W?and?Abbot?B?C.The?role?of?the?creatine?phosphokinase?system?in?muscle.J.Mol.Cell.Cardiol.1976，8：741-746.Yukio?Ishiguro，Kanefusa?Kato?MD.The?diagnostic?and?prognostic?value?of?pretreatment?serum?creatine?kinase?BB?levelsin?patients?with?neuroblastoma.Cancer?1990，65：2014-2019.Kouttinen?A.Purification?of?human?and?canine?creatine?kinase?isozymes.Acta?Med.Scand.Suppl.1978，623：115-117.]。在多種病變，如肌肉萎縮和心肌梗塞發生時，人血清中肌酸激酶水平迅速提高，因此它常用作臨床診斷的指示劑。正常人血清中并沒有MiMi-CK，如其在血清中出現，可能是腫瘤組織泄露所致，應高度懷疑患有惡性腫瘤。所以在心肌梗塞的診斷中測定肌酸激酶活性是做心電圖診斷的重要補充。肌酸激酶因為其具有重要的生理功能和臨床應用價值，已經引起人們廣泛關注和研究。近年來，研究發現肌酸激酶與阿爾茲海默癥(AD)也有著千絲萬縷的聯系，在AD病人體內BB-CK由于受氧化作用的影響，大量失活。研究人員發現在基因改造的AD小鼠腦部發現肌酸的沉積，同樣在AD病人的海馬中也有此現象。肌酸激酶在能量代謝方面發揮重要作用，肌酸激酶的失活使AD病情惡化。進而作者猜想在某個時間點，以肌酸激酶為靶點，也許能夠阻止或者推遲神經退行性疾病[Tanja?S.B?urklen，Uwe?Schlattner，Ramin?Homayouni?et?al.The?Creatine?Kinase/Creatine?Connection?to?Alzheimer’s?disease：CK?Inactivation，APP-CK?Complexes，and?Focal?Creatine?Deposits.Journal?of?Biomedicine?and?Biotechnology?2006，1-11]。