[發(fā)明專利]一種人猴嵌合免疫缺陷病毒株及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010546806.2
• 申請日: 2010-11-17
• 公開（公告）號: CN102465117A
• 公開（公告）日: 2012-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李悅;陳啟民;楊貴波;喬文濤;王金忠;邵一鳴
• 申請（專利權(quán)）人: 南開大學(xué);中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A01K67/027;A61K49/00;C12R1/93
• 代理公司: 天津翰林知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12210
• 代理人: 胡安朋

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明的技術(shù)方案涉及以引入外來基因材料修飾的病毒，具體地說是一種人猴嵌合免疫缺陷病毒株及其應(yīng)用。?

背景技術(shù)

艾滋病，即獲得性免疫缺陷綜合征(acquired?immunodeficiency?syndrome，AIDS)，是由人免疫缺陷病毒(human?immunodeficiency?virus，HIV)引起的，以全身免疫系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p害為特征的傳染性疾病。2007年衛(wèi)生部和聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署估計(jì)中國艾滋病感染者達(dá)到70萬。我國的主要流行毒株是HIV-1?B’/C重組亞型，主要分布于吸毒者較多的云南、貴州、四川、新疆和西北地區(qū)，并隨新疆流動人口傳至華東和華南。?

HIV-1病毒發(fā)現(xiàn)之后的20多年以來，各國研究者對HIV-1的基因組結(jié)構(gòu)、生物功能、與宿主的相互關(guān)系、藥物治療和疫苗研制等方面進(jìn)行了深入研究。目前AIDS治療藥物方面取得了很大進(jìn)展，延長了感染者的生存時間，提高了生存質(zhì)量，但是HIV-1感染者體內(nèi)的病毒并沒有徹底清除。此外藥物治療的副作用及耐藥性問題也沒有得到解決。安全有效的疫苗是控制艾滋病流行最有效的手段。自從上世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)艾滋病病毒以來，各國政府和企業(yè)投入了大量的資金開展了一百多次的艾滋病疫苗臨床試驗(yàn)研究，但絕大部分都沒有顯示出一定的保護(hù)效果。與此同時，殺微生物制劑等預(yù)防性生物制品的研發(fā)也開始起步。?

人類已經(jīng)研制成功的疫苗絕大多數(shù)有合適的動物模型可供進(jìn)行攻毒和免疫保護(hù)測試，以迅速評價(jià)疫苗的有效性和安全性。能真正模擬HIV-1自然感染過程的動物模型的缺乏已經(jīng)成為疫苗和藥物等生物制劑研發(fā)最大的瓶頸之一。猴免疫缺陷病毒(simian?immunodeficiency?virus，SIV)與HIV-1同屬反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬，它可以從不同種的猴體內(nèi)分離得到。猴被某些種類的SIV感染后，會產(chǎn)生類似于AIDS的癥狀。研究者曾經(jīng)認(rèn)為SIV/恒河猴動物模型是研究HIV-1致病和預(yù)防機(jī)制的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”。但是，由于SIV與HIV-1之間存在抗原性差異，使用這個模型具有很大局限性。另外，HIV-1/黑猩猩動物模型在HIV-1致病性和疫苗研究中曾經(jīng)使用，但黑猩猩作為瀕危物種且價(jià)格昂貴，不能大量使用。同時，HIV-1病毒在黑猩猩體內(nèi)復(fù)制的載量水平很低且較難致病，顯然不能滿足對HIV疫苗評價(jià)的要求。?

SHIV(Chimeric?simian/human?immunodeficency?virus)，即SIV/HIV嵌合病毒，是一種通過基因重組技術(shù)置換SIV和HIV-1的相應(yīng)基因而構(gòu)建出來的人造病毒。大部分SHIV病毒是以猴缺陷病毒SIV作為骨架，將其中env，tat和rev基因由人缺陷病毒I?型HIV-1的相應(yīng)基因片斷所替換。SHIV病毒可以有效感染恒河猴等靈長類動物，并且傳代后得到的致病性SHIV可以在短時間內(nèi)誘導(dǎo)感染的動物發(fā)生AIDS疾病。SHIV感染恒河猴的體內(nèi)動物模型在研究HIV-1包膜蛋白的感染性和致病性以及針對含HIV-1包膜蛋白艾滋病疫苗免疫評價(jià)方面發(fā)揮重要作用。另外，在HIV-1抗病毒藥物和微生物殺菌劑藥效學(xué)評價(jià)等研究方面也是很好的工具。?

90年代初期，日本京都大學(xué)的Shibata?R等人首次構(gòu)建出以SIVmac239為親本的嵌合病毒SIV_AGM/HIV-1，可以在人和猴外周血單核淋巴細(xì)胞中有效復(fù)制，并能誘導(dǎo)猴體的體液免疫反應(yīng)。這一模型受到了全世界的廣泛關(guān)注。隨后各國科學(xué)工作者相繼構(gòu)建出一系列攜帶HIV-1不同亞型和不同毒株包膜蛋白基因的SHIV。目前構(gòu)建的SHIV主要利用的包膜蛋白基因來源于B亞型HIV-1毒株。其中，以SIVmac239基因?yàn)榭蚣苤亟M入流行于歐美B亞型HIV-1的tat，rev，env等基因構(gòu)建的B亞型SHIV感染性克隆以及在印度恒河猴體內(nèi)傳代得到的致病性強(qiáng)毒株種類最多，已經(jīng)被艾滋病疫苗研究機(jī)構(gòu)廣泛應(yīng)用。絕大部分表現(xiàn)為CXCR4/CCR5雙嗜性的晚期病毒特點(diǎn)。最具有代表性的是SHIV-89.6P和SHIV-KU1這兩個毒株。?