[發(fā)明專利]遲鈍愛(ài)德華氏菌野生毒株的無(wú)標(biāo)記基因缺失減毒突變株、相關(guān)制劑及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010541646.2
• 申請(qǐng)日: 2010-11-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101974472A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-02-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王啟要;陳濤;王鑫;肖靜凡;劉琴;張?jiān)d
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及減毒突變株技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及魚(yú)用細(xì)菌性減毒活疫苗技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種遲鈍愛(ài)德華氏菌野生毒株的無(wú)標(biāo)記基因缺失減毒突變株、相關(guān)制劑及其應(yīng)用。?

背景技術(shù)

鑒于世界人口的不斷增長(zhǎng)及天然漁業(yè)資源的日益枯竭，水產(chǎn)業(yè)作為一種傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)，在近代得到了快速，有效的發(fā)展，并在社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和人們生活中突現(xiàn)出其重要地位。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2002年我國(guó)水產(chǎn)品總量占全球總產(chǎn)量的71％和總產(chǎn)值的49.8％，居世界第一位。據(jù)FAO統(tǒng)計(jì)，2004年我國(guó)的水產(chǎn)產(chǎn)品總量達(dá)4750萬(wàn)噸。然而，由于水土資源的有限性，從提高養(yǎng)殖面積來(lái)增加產(chǎn)量難以持續(xù)發(fā)展。因此，規(guī)模化、集約化、高密度研制模式逐漸成為我國(guó)魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展主流。然而，隨著漁業(yè)養(yǎng)殖的不斷穩(wěn)步發(fā)展，各種病害問(wèn)題日益突出，對(duì)養(yǎng)殖產(chǎn)量及成長(zhǎng)造成嚴(yán)重影響。在我國(guó)，近幾年發(fā)展起來(lái)的海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖和工廠化養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的突發(fā)性、爆發(fā)性疾病頻繁發(fā)生。目前，我國(guó)的海水養(yǎng)殖平均死亡損失率在30％以上，每年的經(jīng)濟(jì)損失多達(dá)160億元，病害問(wèn)題已成為制約海水養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的重要因素。?

針對(duì)各種病害的發(fā)生，以抗生素為代表的化學(xué)療法對(duì)病害的控制和防治曾發(fā)揮了積極作用。但是，這種病害控制措施造成的環(huán)境污染、抗藥病原的大量出現(xiàn)、水產(chǎn)品的藥物殘留等負(fù)面影響日趨嚴(yán)重。在歐盟、美國(guó)和加拿大，以抗生素為主的化學(xué)藥物在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中已逐漸被禁用。其中，根據(jù)歐盟食品安全白皮書(shū)的規(guī)定，歐盟國(guó)家禁止使用抗生素藥物的養(yǎng)殖水產(chǎn)品進(jìn)入貿(mào)易市場(chǎng)。日本也開(kāi)始限制使用多種抗生素藥物用于養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)和蝦類(lèi)病害的防治。?

作為世界上的水產(chǎn)養(yǎng)殖大國(guó)，我國(guó)的海水養(yǎng)殖品出口量只占到了養(yǎng)殖總量的6％左右，一個(gè)主要的制約因素就是我國(guó)的水產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題突出，藥物和有害物殘留超標(biāo)嚴(yán)重，成為擴(kuò)大出口的主要障礙。近幾年我國(guó)水產(chǎn)品出口因質(zhì)量安全問(wèn)題受到歐盟、日本等國(guó)家和地區(qū)的限制。同時(shí)，由于病害嚴(yán)重，突發(fā)性強(qiáng)，為規(guī)避病害風(fēng)險(xiǎn)，生產(chǎn)者普遍提早收獲，造成產(chǎn)品規(guī)格偏小，也影響了出口率和出口價(jià)格。為了增強(qiáng)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，擴(kuò)大水產(chǎn)養(yǎng)殖的出口創(chuàng)匯，國(guó)家已提出并開(kāi)始推廣建立無(wú)公害養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范，其中一個(gè)主要技術(shù)指標(biāo)就是禁止使用抗生素藥物，以確保養(yǎng)殖水產(chǎn)品的食品質(zhì)量安全。?

為遏制各種環(huán)境因素和養(yǎng)殖密度激增等造成的養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)病害日益嚴(yán)重的發(fā)展趨勢(shì)，推進(jìn)?海水養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，世界糧農(nóng)組織結(jié)合發(fā)達(dá)國(guó)家漁業(yè)發(fā)展的成功經(jīng)驗(yàn)(OrmondeP.Fisheries?resources：trends?in?production，utilization?and?trade.In：Nomura?I(ed.).The?State?ofWorld?Fishery?and?Agriculture2002.Rome：FAO?Information?Division，2002，p3～p45)，倡導(dǎo)“系統(tǒng)管理途徑”(System?management?approaches，SMA)養(yǎng)殖模式預(yù)防各種病害的發(fā)生。這一措施中的一個(gè)主要內(nèi)容就是提倡以疫苗接種為代表的各種免疫防治技術(shù)的應(yīng)用。這些措施的采用將大大減少化學(xué)藥物的使用，既避免了對(duì)環(huán)境的污染，又增加了水產(chǎn)品的消費(fèi)安全性。作為符合環(huán)境友好、可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的經(jīng)濟(jì)有效的疾病控制策略和手段，接種疫苗在現(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)范中正成為世界各國(guó)研究和開(kāi)發(fā)的主要前沿和應(yīng)用領(lǐng)域。?

疫苗具有針對(duì)性強(qiáng)、抗病周期長(zhǎng)、可終身免疫、效果顯著和防治主動(dòng)的特點(diǎn)。以病原菌細(xì)胞滅活體為基礎(chǔ)形式的滅活疫苗(Kill?vaccine)為水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治提供了有效手段，但滅活疫苗普遍具有給藥不便(注射給藥才具有較好的免疫保護(hù)力)的技術(shù)應(yīng)用缺陷，對(duì)于需要免疫成千上萬(wàn)數(shù)量的魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)來(lái)說(shuō)極為不便，給藥成本往往不能為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)所承受。而且，對(duì)于病害發(fā)生嚴(yán)重的魚(yú)苗和幼魚(yú)則無(wú)法實(shí)施注射給藥，同時(shí)，對(duì)許多病害滅活疫苗往往效果不佳或無(wú)效。這一切都給水產(chǎn)養(yǎng)殖病害免疫防治技術(shù)的廣泛應(yīng)用帶來(lái)了阻礙。?

水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的產(chǎn)業(yè)特點(diǎn)要求病害防治技術(shù)必須經(jīng)濟(jì)、應(yīng)用實(shí)施方便。因此，疫苗產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)除高效價(jià)的技術(shù)要求外，免疫成本必須低廉，不能超出養(yǎng)殖業(yè)的承受能力。減毒活疫苗因具有給藥方便(可浸泡給藥)、免疫效價(jià)高(可減少給藥劑量)、成本低廉、可開(kāi)發(fā)廣譜疫苗(活菌疫苗往往具有交叉保護(hù)性)的新技術(shù)優(yōu)勢(shì)，已成為當(dāng)前國(guó)際上水產(chǎn)養(yǎng)殖用疫苗研究和開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)和前沿領(lǐng)域。?