[發明專利]一種人畜兩用檢測血吸蟲抗體試劑盒

無效

• 申請號: 201010541004.2
• 申請日: 2010-11-12
• 公開（公告）號: CN102466728A
• 公開（公告）日: 2012-05-23
• 發明（設計）人: 謝端泉;劉照武
• 申請（專利權）人: 岳陽迅超生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種對人畜兩用血吸蟲檢測方面的設備，特別是一種人畜兩用血吸蟲抗體檢測的試劑盒。

背景技術

日本血吸蟲病曾流行于我國南方12個省(市)、自治區，目前仍在108個縣和57個縣級農場流行，受威脅的人、畜各有近1億。20世紀80年代以來，血吸蟲病防治策略由消滅媒介釘螺轉向以化療為主的綜合性防治措施，由此血吸蟲病的早期診斷工作愈顯重要。家畜是日本血吸蟲的主要保蟲宿主和感染者，其在血吸蟲病的流行過程中起著重要的傳播作用。在血吸蟲病的防治工作中，控制家畜感染源尤為重要，因而除了查治病人外，還必須對流行區的家畜進行查治。目前日本血吸蟲病的診斷方法主要是糞檢法、間接血凝法(IHA)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)。糞檢法費時費力，陽性檢出率也較低，不適合在現場廣泛使用。間接血凝法(IHA法)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)需要儀器設備，操作時間較長，也不方便于現場使用。因此，尋找簡便快速、準確靈敏，并具有考核療效和防治效果以及監測疫情的日本血吸蟲病的診斷方法，已成為當前迫切需要解決的問題。

目前市場上有四川邁克生物科技股份有限公司生產的血吸蟲循環抗原測定試劑盒(ELISA法)、無錫賽德科技開發有限公司生產的血吸蟲抗體(IgG)檢測試劑盒(膠體染料法)和安徽安吉醫藥科技有限公司生產的日本血吸蟲抗體檢測試劑盒(間接血凝法)，沒有一個產品能同時檢測人和多種家畜的血吸蟲抗體的試劑盒。

發明內容

本發明的目的是針對當前市場上對血吸蟲檢測方面的不足之處，發明一種快速、簡便，靈敏度高、特異性好、結果穩定可靠并能長期保存實驗結果，又能同時檢測人和多種家畜血清中血吸蟲抗體試劑盒。

本發明的采用的技術方案如下：一種人畜兩用檢測血吸蟲抗體試劑盒，其特征在于：包括：

a、試劑板：由已包被了日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原和金黃色葡萄球菌A蛋白的硝酸纖維素膜、不滲水海綿、吸水墊經滲水惰性膠水粘貼而成，再分切成固定寬度的板狀，外加聚苯乙烯塑料外殼制成；

b、洗滌液：是向緩沖液中加入保護劑、洗滌劑配置而成的無色或淡黃色液體；

c、金標液：由膠體金標記的SPA紅色液體。

本發明首次用SPA(金黃色葡萄球菌A蛋白)標記膠體金測定日本血吸蟲抗體，解決了實驗室中因SPA與牛、馬、羊等動物IgG親和力較差而無法應用于這類動物檢測的難題，開發出可同時檢測人和多種哺乳動物血清中存在的血吸蟲抗體試劑盒。同時在標記SPA膠體金溶液中加入穩定劑，避免了聚沉現象的產生，極大延長產品的有效期，比市面上其他標記SPA膠體金的產品有效期提高了3倍，從而解決其在實際生產和臨床檢驗中關鍵問題；在膠體金溶液燒制過程中，應用超聲破碎原理，控制金溶液顆粒大小一致，實現了靈敏度和穩定性的優異結合，大幅度提高產品性能；開發出對照蛋白特殊處理技術，避免了大規模檢測時因漏加血清導致的假陰性結果出現，規范了檢測操作，提高了結果可信度；檢測結果能長期保存，可作為以后實驗的參照及查詢依據。技術產品填補國內空白，達國際先進水平。

本發明采用的是膠體金免疫滲濾斑點法原理，使用硝酸纖維素膜(NC膜)作為固相載體，將抗原點樣于NC膜上，加入待測血清濾過NC膜，SPA-膠體金(紅色)則作為顯色劑。如果待測血清中有血吸蟲抗體，則會形成紅色斑點；如果待測血清中不存在血吸蟲抗體，則不會形成紅色斑點。

本發明具有操作簡便、節省時間、靈敏度高、特異性好、結果穩定可靠并能長期保存實驗結果，又能同時檢測人和多種家畜血清中血吸蟲抗體，是一種不需要其他儀器設備就可進行檢測的試劑盒。

具體實施方式

下面根據具體實施方式對本發明作進一步說明：

1、血吸蟲抗原制備：

準確稱取購買的蟲卵100mg加水3ml，超聲波破碎3分鐘，反復凍融5天；3000轉/min離心40min。經離心后的上清液，即為蟲卵抗原原液，保存于-20℃中備用。

2、膠體金的燒制：

a.將1/萬氯化金溶液緩慢加熱，待水溫達到50～60℃(以玻璃器皿外不凝結水蒸氣為標準)；

b.用大火將1/萬氯化金溶液煮沸，煮沸持續2分鐘；

c.迅速加入新鮮配制已溶解好的1％檸檬酸三鈉溶液；

d.觀察膠體金溶液由深紫色轉變為淡紫色，并最終轉變為橘紅色為宜；

e.持續小火，20分鐘；

f.待稍冷卻，密封；

g.使用超聲儀，對燒制好的膠體金溶液超聲破脆，使膠體金溶液顆粒大小均勻。