[發明專利]蛋白質結晶篩選的96條件試劑盒

有效

• 申請號: 201010535521.9
• 申請日: 2010-11-04
• 公開（公告）號: CN102060907A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 尹大川;張仙芳
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: C07K1/30
• 分類號: C07K1/30;C12N9/00;C12N9/50;C12N9/36
• 代理公司: 西北工業大學專利中心 61204
• 代理人: 黃毅新

技術領域

本發明涉及一種用于蛋白質結晶篩選的試劑盒，特別是用于蛋白質結晶篩選的96條件試劑盒。

背景技術

公開號為101817869A的中國專利一種以聚乙二醇作為沉淀劑用于蛋白質結晶篩選96條件試劑盒(PEG?Grid?Screen)，具體組成如表1，包括三部分，沉淀劑、添加劑、緩沖液。沉淀劑包括BMCD數據庫(Biological?Macromolecule?CrystallizationDatabase)中統計出的使用頻率最高的前八種，濃度為10％-30％w/v；添加劑包括11種，分別是：硫酸銨，甲酸鈉、氯化鎂、丙二酸鈉、2-甲基-2，4戊二醇、乙二醇、異丙醇、Tacsimate?pH?7.0、甘氨酸、酒石酸鉀鈉、乙二胺四乙酸，其濃度為0.1M；緩沖液包括4種，分別是：乙酸鈉、檸檬酸鈉、2，2-雙二羥甲基苯胺、N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸，濃度為0.1M，pH值范圍從4到8。

表1：PEG?Grid?Screen?96條件成分表

公開號為101817869A的專利用上述PEG?Grid?Screen?96條件篩選試劑盒對枯草桿菌蛋白酶、溶菌酶、糜蛋白酶原、乳清白蛋白等幾種蛋白進行了結晶條件篩選研究，統計出其長出晶體的條件數分別為：0、26、16、2。

但是PEG?Grid?Screen的局限在于所用PEG種類覆蓋不全，且沉淀劑濃度相對較低，實驗中要得到相同效果所需蛋白質濃度較高，不利于節約成本。

發明內容

為了克服現有的96條件篩選試劑盒在蛋白質結晶條件篩選中成功率低的不足，本發明提供一種以聚乙二醇系列作為主要沉淀劑用于蛋白質結晶篩選96條件試劑盒，本試劑盒所選PEG種類覆蓋齊全，分子量從400到20000，而且還包括聚乙二醇單甲醚550、2000、5000，同時還包括了幾種成功率較高的鹽類如丙二酸鈉，2-甲基-2，4戊二醇，增加了結晶的可能性，可以提高蛋白質結晶條件篩選成功率。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案為：一種蛋白質結晶篩選的96條件試劑盒，包括緩沖液、沉淀劑和添加劑，其特點是成分組成如下表：

所述沉淀劑是PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG3350、PEG400、PEG1000、PEG2000、PEG10000、PEG2000、PEG?550MME、PEG?2000MME、PEG?5000MME、硫酸銨、2-甲基-2，4戊二醇或Tacsimate的任一種。

所述添加劑是一價鹽、二價鹽、三價鹽、己二醇或乙二胺四乙酸的任一種。

所述緩沖液是2，2-雙二羥甲基苯胺、咪唑-鹽酸、檸檬酸鈉-檸檬酸、N，N-雙(2-羥乙基)甘氨酸、三羥甲基氨基甲烷或哌嗪-N，N-雙(2-乙磺酸)的任一種。

本發明的有益效果是：本試劑盒所選PEG種類覆蓋齊全，分子量從400到20000，而且還包括聚乙二醇單甲醚550、2000、5000，同時還包括了幾種成功率較高的鹽類如丙二酸鈉，2-甲基-2，4戊二醇，增加了結晶的可能性，提高了蛋白質結晶條件篩選成功率。②本試劑盒所用的pH范圍從3到9，覆蓋了大部分蛋白質可結晶的pH區間，從而提高結晶的成功率；③本試劑盒所選沉淀劑的濃度相對較高，因此要得到相同的實驗效果本試劑盒所需的蛋白質樣品的濃度相對較低，節省了實驗成本。

具體實施方式

配制PEG?Crystal?Screen?96篩選條件：配制100mLB1，以B1(0.1M的pH3.5的檸檬酸、30％v/v的PEG1000、0.2M一水硫酸鋰)為例：第一步：配好濃度為1M，pH3.5的檸檬酸緩沖液；第二步：配好濃度為50％w/v的PEG1000和濃度為1M的一水硫酸鋰；第三步：用移液管吸取10mL檸檬酸緩沖液、20mL一水硫酸鋰、60mL50％w/v、10mL三蒸水到100mL燒杯中使其混勻，再用0.22μm的濾膜過濾到100mL管中，B1條件配制完畢。同樣的方法配制其他條件。下面用幾種蛋白質的結晶實驗來驗證該試劑盒的效果，以背景技術作為對照。

實施例1：用上述配制的PEG?Crystal?Screen?96條件對枯草桿菌蛋白酶(subtilisin?AVII)進行條件篩選。