[發明專利]一種抗黑色素瘤的CTL多表位肽及其應用

無效

• 申請號: 201010534136.2
• 申請日: 2010-11-05
• 公開（公告）號: CN102030829A
• 公開（公告）日: 2011-04-27
• 發明（設計）人: 孫樹漢;單石;郭瀛軍;章意亮;王越;劉音
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

1.一種抗黑色素瘤的CTL多表位肽，其特征在于所述的多表位肽具有SEQ?ID?NO：5所示的氨基酸序列：

2.一種編碼權利要求1所述的CTL多表位肽的核苷酸序列。

3.根據權利要求2所述的編碼CTL多表位肽的核苷酸序列，其特征在于該核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。

4.含有權利要求3所述核苷酸序列的質粒。

5.根據權利要求4所述的質粒，其特征在于該質粒是pc-HH。

6.含有權利要求5所述質粒的細胞。

7.根據權利要求6所述的細胞，該細胞是大腸桿菌BL21-CP-RIL。

8.權利要求1所述的抗黑色素瘤的CTL多表位在制備預防和治療黑色素瘤藥物中的應用。

9.根據權利要求8所述的抗黑色素瘤的CTL多表位在制備預防和治療黑色素瘤藥物中的應用，其特征在于該藥物是一種嵌合表位疫苗，它的活性成份是編碼HBc(1-75aa)-權利要求1所述的CTL多表位肽-HBc(75-144aa)基因和HLA-A*0201與H-2k^b基因。

10.根據權利要求9所述的抗黑色素瘤的CTL多表位在制備預防和治療黑色素瘤藥物中的應用，其特征在于該嵌合表位疫苗的活性成份的制備包括如下步驟：

A、將編碼HBcAg(aa1-75)、HBcAg(aa76-144)和多表位的基因序列經PCR的方法進行連接，形成一個HBC(1-75aa)-權利要求1所述的CTL多表位肽-HBc(75-144aa)嵌合基因；

B、取200g?HLA-A2轉基因小鼠的脾臟組織樣本，抽取總RNA，逆轉錄合成cDNA，再以cDNA為模板，用PCR方法分別擴增HLA-A*0201與H-2k^b基因，然后采用重疊區延伸法連接，得到融合基因HLA-A*0201/K^b；

C、表達質粒pc-HH，所述表達質粒為長度9.3Kb的環形雙鏈，克隆有編碼HBC(1-75aa)-權利要求1所述的CTL多表位肽-HBc(75-144aa)嵌合基因和融合基因HLA-A*0201/K^b的基因序列，并含有T7啟動子；

D、表達質粒pc-HH的構建方法，系將HBc(1-75aa)-權利要求1所述的CTL多表位肽-HBc(75-144aa)嵌合基因和HLA-A*0201/K^b融合基因用Mlu?I和Xho?I雙酶切，然后然后與用Mlu?I和Xho?I雙酶切的pIRES相連；

E、工程菌BL21(pc-HH)，為大腸桿菌BL21-CP-RIL。