[發明專利]一種用于多巴胺檢測的薄層檢測池及其制備方法

無效

• 申請號: 201010528265.0
• 申請日: 2010-11-01
• 公開（公告）號: CN102455313A
• 公開（公告）日: 2012-05-16
• 發明（設計）人: 王丹;張鵬;王瑾
• 申請（專利權）人: 上海納米技術及應用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: G01N27/27
• 分類號: G01N27/27;G01N27/30;G01N30/89
• 代理公司: 上海東方易知識產權事務所 31121
• 代理人: 唐莉莎

技術領域

本發明涉及的是一種電化學檢測技術領域的裝置及其制備方法，具體是一種用于多巴胺檢測的薄層檢測池及其制備方法。

背景技術

帕金森病是一種常發生于老年人以黑質多巴胺能神經元特征性缺失為主要病理改變的中樞神經系統變性疾病，其臨床癥狀主要表現為靜止性震顫、運動遲緩、肌張力增高等，其發病率隨年齡的增加而提高，如果患者沒有得到及時合理的診斷與治療，很容易導致身體機能下降，甚至生活不能自理，最后出現各種并發癥，如肺炎、秘尿系統感染等。病情發展到晚期將會全身僵直，臥床不起，導致器官功能衰竭而危及生命。研究表明，多巴胺作為生物體中一種非常重要的神經遞質，它的濃度與帕金森病的發生有著密切關系。由此可見檢測多巴胺的水平對帕金森病病理的研究具有重要意義。

由于多巴胺缺少發光基團，這限制了目前很多測定多巴胺的方法的應用，例如：熒光光譜法，紫外分光光度法，極譜法和氣相色譜-質譜聯用法等。因此尋找一種靈敏，高效的檢測多巴胺的方法具有重要意義。液相色譜-電化學檢測技術由于具有所需樣品少，靈敏度高，分離效率高和進樣體積小等特點而廣泛用于生物樣品的檢測，但是由于生物體內多巴胺的含量很低，因此開發出高靈敏度(用于體內痕量多巴胺的檢測)測定多巴胺的電化學傳感器引起了人們的研究興趣。

經過現有技術的檢索發現，“用于多巴胺檢測的薄層檢測池及其制備方法”提出利用聚乙烯醇和鉑粒子修飾的電極檢測多巴胺；“體液中多巴胺的電化學檢測方法”提出檢測多巴胺的方法是利用納米氧化鈰及聚丙烯酸修飾電極進行檢測。雖然兩種檢測方式都實現了多巴胺的檢測，但是兩種電極都是經過兩步修飾后制得，過程繁瑣，并均需要貴金屬粒子。

發明內容

本發明針對現有技術存在的上述不足，提供一種用于多巴胺檢測的薄層檢測池及其制備方法，通過簡單步驟實現對生物樣品中多巴胺濃度的檢測。

本發明是通過以下技術方案實現的，一種用于多巴胺檢測的薄層檢測池，包括：工作電極、參比電極和輔助電極，其中：工作電極、參比電極、輔助電極分別與高效液相色譜及電化學系統相連接，其特征在于，所述的工作電極包括：尼古丁層和電極基體，其中：尼古丁層沉積包覆于電極基體外部。

所述的工作電極中尼古丁層的厚度(H)為50～800納米；所述的電極基體為玻碳材質的電極基體。

本發明提供一種用于多巴胺檢測的薄層檢測池的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

第一步：工作電極的制備：

將玻碳電極進行拋光處理后，在二次蒸餾水中超聲清洗；

清洗后的玻碳電極放入pH＝5.0～7.0的磷酸鹽緩沖溶液中，在-0.2V～+2.0V的電位范圍內，以15-20mV/s的掃描速率進行循環掃描處理10～20周期；

循環掃描后的玻碳電極放入質量百分比為0.7％～5.0％尼古丁的磷酸鹽緩沖溶液中，該緩沖溶液的pH＝5.0～7.0，在0.0V～+1.0V的電位范圍內，以15～20mV/s的掃描速率再次進行循環掃描處理6～30個周期；

將經過二次循環掃描處理后的玻碳電極取出后，用二次蒸餾水清洗，制得工作電極；

第二步：依次將參比電極、工作電極和輔助電極與高效液相色譜及電化學系統相連，其中：參比電極為Ag-AgCl電極；輔助電極為不銹鋼制成的電極；高效液相色譜采用Luna?5μmC18反相色譜柱，液相色譜使用的流動相為含有10％～30％甲醇和0.2mol/L的pH＝5.0～7.0的磷酸鹽緩沖溶液，該流動相的流速為1.0mL/min，制成用于多巴胺檢測的薄層檢測池。

所述的磷酸鹽緩沖溶液是指：磷酸根濃度為0.2mol/L的磷酸二氫鉀或磷酸氫二鈉溶液，利用磷酸調節pH值。

本發明通過以下步驟進行檢測：

首先打開液相色譜及電化學系統，使得不同已知濃度的多巴胺樣本隨磷酸鹽緩沖溶液經Luna?5μm?C18反相色譜柱，依次流過參比電極、工作電極和輔助電極的表面；

然后利用CHI832型電化學系統記錄下不同樣本產生的電流信號，根據不同樣本下的已知多巴胺濃度及對應實測的響應電流的電流值作為縱橫坐標進行擬合，對薄層檢測池進行樣本學習；

再將腦微滲析液樣品20μL置于制備好測試環境中，測得響應電流的電流值，根據經過樣本學習得到的多巴胺濃度-相應電流的線性關系圖讀出該電流值對應的腦微滲析液樣品中所含的多巴胺濃度。