[發明專利]一種過氧化氫酶固體脂質納米粒制劑的制備方法

有效

• 申請號: 201010522545.0
• 申請日: 2010-10-28
• 公開（公告）號: CN101972229A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發明（設計）人: 黃健花;陳焱;王興國
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K38/44;A61P39/06
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技術領域：

本發明涉及一種過氧化氫酶固體脂質納米粒制劑的制備方法。

背景技術：

自由基是人體進行生命活動時所產生的一種活性分子，在正常代謝過程中，自由基具有調節細胞間的信號傳遞和細胞生長、抑制病毒和細菌的作用；但如果體內自由基過多，將導致細胞和組織器官損傷，并誘發各種疾病、加速機體衰老。正常情況下，機體通過自我產生或者從外界攝取的方式獲得超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)等內源性抗氧化劑和維生素、微量元素等外源性抗氧化劑，這些抗氧化劑對自由基的損害構成了一個天然的屏障。由于某些情況(如高血壓病人)下，機體自我產生的內源性抗氧化劑(如過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化酶型、谷胱甘肽還原酶)會不足，因此通過外在手段給這些病人加入內源性抗氧化劑十分必要。

過氧化氫酶作為生物演化過程中建立起來的生物防御系統的關鍵酶之一，是一種非常有效的抗氧化劑，被廣泛用于醫藥行業，起到抗氧化、清除自由基等作用。但是過氧化氫酶作為一種蛋白類藥物，存在諸多缺點，主要表現在穩定性差，在酸、堿或酶的作用下易失活；分子量大且常以多聚體形式存在，難以通過胃腸道豁膜細胞，導致吸收屏障的產生；使用不便，一般只能注射給藥；體內半衰期短，消除快，無法充分發揮其療效；在體內只與特定的受體結合而起作用，受體在組織的分布特性會顯著影響蛋白藥效。因此需對其進行適當處理改善上述問題。

固體脂質納米粒(solid?lipid?nanopartieles，SLN)是以固態的天然或合成的類脂如卵磷脂、三酰甘油等為載體，將藥物包裹于類脂核中，經不同方法制成的粒徑在50-1000nm之間的固態膠粒給藥體系，是用于保護藥物和控制藥物釋放的新型給藥系統。SLN的優點在于顆粒粒徑小，在納米數量級，可用于注射給藥；生理相容、體內可降解，生理可接受性佳，制備過程無毒物殘留；制備過程簡單、毒性低、藥物泄漏慢、物理穩定性高、通過對其表面進行特征修飾，可實現靶向給藥、具有工業大規模生產潛力等優點。

發明內容：

本發明的目的是提供一種過氧化氫酶固體脂質納米粒制劑的制備方法。

本發明的有益效果：采用將固態脂質中加入一定量液態脂質作為基質載體的方法制備產品，固體脂質中混合液態脂質，可擾亂固體脂質的規則性晶型結構，增加納米粒晶體結構中不規則晶型的比例，使承載藥物的空間容量增加，納米粒載藥能力提高。

技術方案：采用兩步乳化法，將過氧化氫酶溶于水中作為內水相加入至含有固體脂質、液態脂質和乳化劑的有機溶劑中，進行第一步超聲乳化；再將得到的乳狀液加入到含有親水性乳化劑的外水相中，進行第二步超聲乳化；旋轉蒸發有機溶劑，冷凍離心即得過氧化氫酶固體脂質納米粒。

如將上述離心得到的過氧化氫酶固體脂質納米粒冷凍干燥即得凍干制劑。

過氧化氫酶固體脂質納米粒制劑的制備方法更為詳細的步驟如下：

1、稱取過氧化氫酶加至水中形成酶溶液構成內水相。

2、第一步乳化：稱取80-100mg固態脂質，按固態脂質的0-20％稱取液態脂質，兩者共同溶于1-3mL有機溶劑，按固態脂質的10-18％向其中加入乳化劑，將內水相加入其中并超聲乳化20-25s，即得W/O乳狀液。

3、第二步乳化：將W/O乳狀液加入至含有1-3％外相乳化劑的外水相中，超聲乳化25-30s，即得W/O/W乳狀液。

4、將得到的W/O/W乳狀液旋轉蒸發(30-35℃)去除有機溶劑，并冷凍離心(12000-15000rpm，25-30min，4-8℃)即得過氧化氫酶固體脂質納米粒。

若制備凍干制劑，則繼續如下步驟：

5、將冷凍離心后的制劑冷凍干燥。

包封率的測定

考馬斯亮藍法間接測定蛋白含量，測定酶溶液和離心后上清液的蛋白含量，根據下式計算包封率：

粒徑和電位的測定

將冷凍離心得到的納米粒稀釋至一定濃度用納米粒度及ZETA電位分析儀測定。

具體實施方式：

實施例1