[發明專利]一種抗Ⅲ型前膠原氨基末端肽單克隆抗體及其用途

有效

• 申請號: 201010517991.2
• 申請日: 2010-10-22
• 公開（公告）號: CN102020715A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發明（設計）人: 周季余;黃桂民;黃波
• 申請（專利權）人: 上海貝西生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 上海海頌知識產權代理事務所(普通合伙) 31258
• 代理人: 何葆芳

技術領域

本發明涉及一種抗III型前膠原氨基末端肽單克隆抗體及其用途，屬于生物技術領域。?

背景技術

III型前膠原氨基末端肽(簡寫為PIIINP)是III型前膠原分泌到細胞外后被蛋白酶切下的N端肽，前膠原轉化為膠原時，被分解下來的前膠原肽可在體內存在一定時間，血清中的III型前膠原氨基末端肽可作為判定肝纖維化的指標。III型前膠原氨基末端肽與肝纖維化形成的活動程度密切相關。其升高程度與炎癥、壞死和肝纖維化程度有關。與體內沉積的膠原無關。而是反映肝纖維化發生和發展的動態過程。III型前膠原氨基末端肽持續升高的慢性活動性肝炎，提示病情可能會惡化并向肝硬變形成發展，而III型前膠原氨基末端肽降至正常可預示病情緩解，因此，測定血清中III型前膠原氨基末端肽含量在輔助診斷肝纖維化中具有重要價值。?

肝纖維化是指肝細胞發生壞死及炎癥刺激時，由于細胞外基質的形成和降解的平衡失調，導致肝臟內纖維結締組織異常增生的病理過程。臨床上對肝纖維化的診斷方法主要有肝組織病理學診斷、影像學檢查及血清學診斷。血清學診斷是研究最廣泛的肝纖維化診斷方法，其最常用的肝纖維化指標有透明質酸、層粘蛋白、III型前膠原氨基末端肽、IV型膠原等。這些血清學指標的高低與肝纖維化嚴重程度密切相關，因而可用于診斷肝纖維化。血清化驗的優點是取材方便、容易復查，如果能定期檢查(如每半年或一年)則可以根據這些指標是升高或降低的總趨勢來了解肝臟纖維化的發展變化情況，也能大致了解抗纖維化的治療的臨床效果。?

除了對肝纖維化進行輔助診斷，有文獻報道將血漿III型前膠原氨基末端肽(PIIINP)作為心肌纖維化的指標，用來評估在急性心肌梗死(AMI)、高血壓時心肌?纖維化的情況。聞心培等報道的肺部疾病PIIINP值均增高，反映肺內膠原合成代謝處于活躍階段，大量膠原(包括I、II、III型膠原)沉積臟器而致臟器纖維化。?

基于雙抗體夾心法原理的固相酶聯免疫法(ELISA)是檢測抗原最常用的方法，在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步檢測。在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成″夾心復合物″。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象，此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低于實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應(hook?effect)，因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。但用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。?

發明內容

本發明的目的是提供一種高親和力的抗III型前膠原氨基末端肽單克隆抗體及其在雙抗體夾心固相酶聯免疫法制備的檢測試劑盒中的應用，以克服此類試劑容易產生的鉤狀效應，提高對III型前膠原氨基末端肽的檢測靈敏度和準確性。?

本發明所提供的抗III型前膠原氨基末端肽單克隆抗體，其特征在于：其輕鏈的氨基酸殘基序列如SEQ?ID?No.1所示，其重鏈的氨基酸殘基序列如SEQ?IDNo.2所示。?

所述的抗III型前膠原氨基末端肽單克隆抗體，是由保藏號為：CCTCC?NO.C201058的雜交瘤細胞株4E5F4A11分泌產生。?

所述的雜交瘤細胞株是以III型前膠原氨基末端肽為免疫源，小鼠為免疫對象，通過免疫注射小鼠，取免疫小鼠脾臟制備懸液，并使之與骨髓瘤細胞進行細胞融合獲得。?

所述的抗III型前膠原氨基末端肽單克隆抗體，屬于IgG亞型。?

所述的抗III型前膠原氨基末端肽單克隆抗體的腹水效價為1∶10⁶。?