[發明專利]一種利用生物反應器大規模生產流感病毒的方法

有效

• 申請號: 201010513446.6
• 申請日: 2010-10-15
• 公開（公告）號: CN101979517A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 張許科;孫進忠;喬榮岑
• 申請（專利權）人: 洛陽普萊柯生物工程有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營;張煥亮

1.一種流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)細胞的接種和吸附培養：將哺乳動物細胞接種到潮汐式生物反應器載體罐(8)內的載體(9)上，進行細胞的吸附培養；

2)在細胞的吸附培養結束后進行細胞的擴增培養；

3)將流感病毒接種到擴增培養的細胞上，進行病毒的吸附培養；

4)在病毒的吸附培養結束后進行病毒的增殖培養；和

5)在病毒含量達峰值后，收獲含有流感病毒的培養液，

其中步驟1)至4)中的培養在潮汐培養條件下進行，所述潮汐培養條件是通過泵出或泵入載體罐(8)內的培養液以間歇性淹沒與暴露載體實現的。

2.根據權利要求1所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述載體罐(8)與裝有培養液的培養液袋(6)以能夠將培養液袋內的培養液泵入載體罐中和能將載體罐內的培養液泵入培養液袋中的方式相聯通。

3.根據權利要求1所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述載體罐中的載體由選自多糖類、膠原、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、明膠、玻璃、纖維素、聚乙烯和塑料中的一種或多種制成。

4.根據權利要求3所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述載體罐中的載體是臺灣CESCO?Bioengineering公司生產的“BioNOC?II”載體。

5.根據權利要求1所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述載體罐中的載體占載體罐容積的40％～100％(V/V)。

6.根據權利要求1～5中任一項所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述的潮汐式生物反應器載體罐容積為2～200L。

7.根據權利要求1～5任一項所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述流感病毒是A型流感病毒或B型流感病毒。

8.根據權利要求7所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述的A型流感病毒為選自H1、H3、H5、H7和H9亞型中的一種。

9.根據權利要求8所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述的A型流感病毒為選自H9N2、H1N1、H5N3、H7N2和H3N2亞型中的一種。

10.根據權利要求9所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，在步驟3)中的病毒接種按照感染復數為0.001～1進行。

11.根據權利要求10所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，在步驟3)中的病毒接種按照感染復數為0.01～0.1進行。

12.根據權利要求8～11中任一項所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述哺乳動物細胞為MDCK細胞系或Vero細胞系。

13.根據權利要求12所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，在步驟1)中以0.5×10⁷～5×10⁷cells/g載體的終密度接種細胞。

14.根據權利要求13所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，在步驟2)中的細胞擴增培養達到0.7×10⁸～10×10⁸cells/g載體的細胞密度時進行步驟3)所述的病毒接種。

15.根據權利要求14所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，步驟1)中所述的吸附培養和步驟2)中所述的擴增培養使用含2％～10％(V/V)牛血清的細胞培養液；步驟3)中所述的病毒吸附培養和步驟4)中所述的病毒增殖培養使用無血清的細胞培養液，其中所述的細胞培養液為選自DMEM、MEM、α-MEM、EMEM、1640、M199、F10和F12中的一種，所述的牛血清為胎牛血清、新生牛血清或小牛血清。

16.根據權利要求15所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述的無血清的細胞培養液中添加了TPCK胰酶。

17.根據權利要求16所述的流感病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述無血清的細胞培養液中添加的TPCK胰酶濃度為0.5～10mg/L。

18.根據權利要求17所述的方法，其特征在于，所述無血清的細胞培養液中添加的TPCK胰酶濃度為1～5mg/L。