[發(fā)明專利]新城疫病毒抗體診斷試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010513427.3
• 申請日: 2010-10-21
• 公開（公告）號: CN101995466A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳紅云;范金紅;李建正
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州后羿制藥有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種雞新城疫病毒抗體的診斷試劑盒，屬于動(dòng)物傳染病的診斷技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

雞新城疫(Newcastle?Disease，ND)是由副粘病毒科(paramyxovirus)副粘病毒屬雞新城疫病毒引起的雞的一種急性、高度接觸性傳染病，常呈敗血性經(jīng)過。主要特征是呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、粘膜和漿膜出血。本病傳播快、死亡率高，被列為第一類嚴(yán)重的傳染病。

回顧歷史，新城疫在世界上曾造成過巨大的經(jīng)濟(jì)損失。一般認(rèn)為雞新城疫于1926年首次暴發(fā)于印度尼西亞的爪哇和英國的紐卡斯?fàn)柊痤D1935年我國河南首次報(bào)道雞新城疫，20世紀(jì)50年代本病在全國各地廣泛流行，本病為高度接觸性傳染性疫病，發(fā)病急，感染率和死亡率均高，有時(shí)可高達(dá)100%，給養(yǎng)禽業(yè)特別是養(yǎng)雞業(yè)造成了不可估量的經(jīng)濟(jì)損失，因此被國際獸醫(yī)局定為A類烈性傳染病。

新城疫實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)包括常規(guī)的分離鑒定是目前診斷新城疫最確切的方法，并且可以給感染的毒株定性。血清學(xué)方法有血凝(HA)和血凝抑制實(shí)驗(yàn)(HI)、瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)(AGP)、熒光抗體技術(shù)(FA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、中和試驗(yàn)(NT)、乳膠凝集試驗(yàn)(LAT)、神經(jīng)氨酸酶試驗(yàn)(NIT)、放射免疫試驗(yàn)(RIA)等。其中HA和HI是目前最常用的方法。分子生物學(xué)方法：RNA指紋圖譜巷國、核酸探針技術(shù)、RT-PCR技術(shù)以及抗多膚抗體技術(shù)等大量報(bào)道用于NDV檢測，分子生物學(xué)方法因?yàn)殪`敏度高、性好、能夠區(qū)分強(qiáng)弱毒株，在NDv的診斷和流行病學(xué)的普查方面頗具潛力。

而Hl效價(jià)水平的監(jiān)測對認(rèn)識雞群新城疫的免疫水平和確定免疫時(shí)機(jī)有重要的指導(dǎo)作用，但還必須正確對待抗體效價(jià)監(jiān)測的診斷學(xué)意義。趙虎等研究發(fā)現(xiàn)HI效價(jià)在6以上的個(gè)體仍能感染并排出強(qiáng)毒，究其原因可能是Hl抗體水平與ND保護(hù)力兩者之間的不一致，應(yīng)該看到，Hl抗體滴度只是衡量雞抵抗力強(qiáng)弱的一個(gè)比較容易檢測到的、具有參考價(jià)值的指標(biāo)，但它只能檢測到循環(huán)抗體水平(IgG)，而不能檢測到呼吸道的抗體水平(IgA)，所以它不是一個(gè)絕對安全的指標(biāo)。在生產(chǎn)中，HI抗體水平的監(jiān)測結(jié)果只能是作為參考，千萬不能認(rèn)為HI抗體水平高，ND就不會(huì)發(fā)生。選用ND抗體檢測的常規(guī)血清技術(shù)對于了解免疫效果，制定免疫程序和診斷，防治該病具有十分重要的意義。雖然HI法用于檢測ND抗體至今仍被廣泛使用,但是由于ELISA具有快速、準(zhǔn)確、簡便的優(yōu)點(diǎn)，加之酶標(biāo)讀數(shù)儀一體化技術(shù)在ELISA中的應(yīng)用,使其更加完善，ELISA已越來越多的被實(shí)驗(yàn)室采用。鑒于新城疫對養(yǎng)禽業(yè)的危害，控制新城疫具有重大的經(jīng)濟(jì)意義。免疫接種已成為控制新城疫最主要的手段，但免疫雞群卻依然經(jīng)常發(fā)生新城疫，其中最主要原因是免疫程序不合理、缺乏免疫抗體監(jiān)測條件，不能根據(jù)疫情和疫區(qū)發(fā)病特點(diǎn)適時(shí)調(diào)整免疫程序。合理的免疫程序的制定、良好的抗體監(jiān)測是目前預(yù)防和控制雞新城疫最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，這有賴于敏感、特異、快速的抗體檢測技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種新城疫病毒抗體診斷試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案采用了一種雞新城疫病毒抗體診斷試劑盒，包括10倍濃縮洗滌液，血清稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)血清，抗雞IgG酶標(biāo)抗體，酶標(biāo)抗體稀釋液，顯色劑A?，顯色劑B和終止液。

所述的濃縮洗滌液為PBST，其含0.05%Tween-20的PBS溶液。

所述的血清稀釋液為1％的BSA溶液。

所述的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清為用LaSota疫苗株免疫后得到完全保護(hù)的雞血清，標(biāo)準(zhǔn)陰性血清為從未用過疫苗且抗體水平接近陰性血清平均值的雞血清。

所述的酶標(biāo)抗體稀釋液為PBS?緩沖液。

所述的顯色劑A組成為：底物OPD一片、底物緩沖液。

所述的顯色劑B為H₂O₂。

所述的終止液：2M?的H₂SO₄。

本發(fā)明的試劑盒是將檢測血清樣品進(jìn)行預(yù)處理后，與包被好的抗原相結(jié)合，利用酶標(biāo)記的抗體與待檢血清樣品中的抗原或抗體特異性結(jié)合后，在底物溶液參與下顯色進(jìn)行檢測，其中，抗原包被液為純化的雞新城疫病毒。