[發明專利]通過體細胞胚胎誘導四合木再生植株的方法

有效

• 申請號: 201010511430.1
• 申請日: 2010-10-19
• 公開（公告）號: CN101953306A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發明（設計）人: 許亦農;平文麗;吳韓英;李敏春
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.四合木的胚性愈傷組織誘導培養基，是在1/2MS培養基的基礎上添加MES、水解酪蛋白、肌醇、活性炭、CuSO₄、AgNO₃、6-BA、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、煙酸、肌醇、碳源和凝膠劑，得到的固體培養基；

所述添加的物質在所述胚性愈傷組織誘導培養基中的終濃度是：MES?0.4-1.0g/L、水解酪蛋白450-550mg/L、肌醇80-120mg/L、活性炭0.3-0.7g/L、CuSO₄?20-30mg/L、AgNO₃?3-8mg/L、6-BA?0.5-1.5mg/L、鹽酸硫胺素0.5-12mg/L、鹽酸吡哆醇0.5-1.5mg/L、煙酸0.5-1.5mg/L、肌醇90-110mg/L；

所述1/2MS培養基的溶劑是水，溶質如表2所示。

2.如權利要求1所述的胚性愈傷組織誘導培養基，其特征在于：所述添加的物質在所述胚性愈傷組織誘導培養基中的終濃度是：MES?0.6g/L、水解酪蛋白500mg/L、肌醇100mg/L、活性炭0.5g/L、CuSO₄?25.025mg/L、AgNO₃?5mg/L、鹽酸硫胺素10mg/L、鹽酸吡哆醇1mg/L、煙酸1mg/L、肌醇100mg/L、6-BA?1.0mg/L。

3.如權利要求1或2所述的胚性愈傷組織誘導培養基，其特征在于：所述凝膠劑是瓊脂、卡拉膠或植物凝膠，優選是植物凝膠；所述植物凝膠的終濃度是2-5g/L，優選為3.0g/L；

所述碳源是葡萄糖、麥芽糖或蔗糖，優選為蔗糖；所述蔗糖的終濃度是25-40g/L，優選為30g/L。

4.一種生產四合木再生植株的方法，包括如下步驟：

1)將切下的四合木的莖誘導，形成愈傷組織；

2)將步驟1)得到的愈傷組織接入權利要求1-3中任一所述的胚性愈傷組織誘導培養基中，形成胚性愈傷組織；

3)將步驟2)得到的胚性愈傷組織進行成熟和萌發培養，形成芽，得到所述再生植株。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于：步驟1)中，所述誘導是將所述切下的四合木的莖接入愈傷培養基中進行培養的；所述愈傷培養基是在MS培養基的基礎上添加2，4-D、6-BA、碳源和凝膠劑得到的固體培養基；所述2，4-D和6-BA在所述愈傷培養基中的終濃度是如下a)或b)：

a)2，4-D?0.15-1.35mg/L和6-BA?0.05-1.5mg/L；

b)2，4-D?0.25mg/L和6-BA?0.1mg/L；

所述MS培養基的溶劑是水，溶質如表1所示。

6.如權利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述方法還包括步驟1)和步驟2)之間的繼代培養，所述繼代培養是將所述步驟1)得到的愈傷組織接入繼代培養基中進行繼代培養；所述繼代培養基與所述愈傷培養基相同。

7.如權利要求4-6中任一所述的方法，其特征在于：步驟3)中，所述成熟和萌發培養包括如下步驟：將所述步驟2)得到的胚性愈傷組織接入成熟和萌發培養基中培養得到芽；所述成熟和萌發培養基是在權利要求1-3中任一所述的胚性愈傷組織誘導培養基的基礎上去掉所述活性炭、所述6-BA濃度減半并且添加NAA得到的培養基；所述成熟和萌發培養基中的NAA終濃度是0.1-0.5mg/L，優選是0.5mg/L。

8.如權利要求4-7中任一所述的方法，其特征在于：所述方法還包括步驟3)之后的芽伸長；所述芽伸長包括如下步驟：將步驟3)得到的芽插入伸長培養基中進行培養，得到小苗；所述伸長培養基在權利要求1-3中任一所述的胚性愈傷組織誘導培養基的基礎上添加GA₃得到的培養基；所述伸長培養基中的GA₃終濃度是0.1-0.2mg/L，優選是0.1mg/L。