[發明專利]一種快速分析濃香型白酒窖池微生物群落結構的方法

無效

• 申請號: 201010509995.6
• 申請日: 2010-10-18
• 公開（公告）號: CN102455331A
• 公開（公告）日: 2012-05-16
• 發明（設計）人: 周榮清;鄭佳;秦臻;黃鈞
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: G01N30/72
• 分類號: G01N30/72;G01N1/34;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是關于白酒窖池微生物群落結構分析，尤其是關于濃香型白酒窖池微生物群落結構分析的一種免培養生物化學方法。

背景技術

與本發明相關的發明、相關的技術有磷脂脂肪酸譜圖技術，檢索發現，有如專利申請號為200410062448.2記載了用磷脂脂肪酸譜圖技術分析土壤微生物群落的多樣性，報道了一種用于分析土壤微生物群落多樣性的生物化學方法，稱取一定量的土壤材料；加入緩沖液和有機試劑，獲得含有脂質的有機相；有機相經硅酸柱分離，收集含有極性脂的洗脫液；在堿性環境下進行甲酯化反應，得到脂肪酸甲酯；使用氣相色譜-質譜聯用儀定量分析脂肪酸甲酯，得到的樣品中不同種類磷脂脂肪酸的含量；計算多樣性指數，判斷土壤微生物群落結構的多樣性情況。對研究微生物群落多樣性及相關研究，特別是對準確評價農田生態、并對將來的發展進行預測具有十分重要的實際意義，提供了準確快速的手段。有如專利申請號為：200810031165.X記載了一種同時提取堆肥樣品中PLFA和DNA的方法，提供了一種同一堆肥中同時提取和純化磷脂脂肪酸PLFA和脫氧核糖核酸DNA的方法，該提取方法是以脂質提取方法為基礎，在相分離后，脂質進入有機相，DNA留在水相及固相，最終實現PLFA和DNA的同時提取；本發明的優點是簡化了堆肥樣品脂質和DNA提取的程序，保證了樣品信息來源的同一性，能較好地減小堆肥取樣對檢測方法造成的誤差，同時，在樣品量很少的情況下顯得更有意義。有如專利申請號為：200610046016.1記載了多環芳烴污染土壤中原為降解菌及生物修復能力鑒定方法，利用磷脂脂肪酸分析(PLFA)技術和穩定同位素比率質譜技術(IRMs)結合鑒定PAHAs污染土壤中原為高效降解菌的新方法，利用磷脂脂肪酸為生物標記物，結合穩定同位素示蹤技術，根據土壤中提取磷脂脂肪酸的δ值的差異鑒定原位土壤中PAHs的降解菌或菌群，也可分析出已知菌株是否為污染土壤的土著降解菌。該方法可有效的將微生物的群落結構和功能結合起來，提供一種可真實反應PAHs污染土壤中原位降解菌或菌群的方法，從而可以分析出所選菌株是否為污染土壤中的土著降解菌及其降解能力，方法精確度高，非常適用于PAHs污染土壤原位微生物修復研究和驗證。

發明內容

本發明的目的在于提供一種快速、全貌分析濃香型白酒窖池微生物群落結構的免培養生物化學方法。

為了實現上述目的，本發明是這樣實現的：稱取一定量的窖泥和糟醅或量取一定體積的黃水，進行前處理；加入緩沖液和有機試劑，提取并得到含有脂質的有機相；經硅膠小柱分離和溫和甲酯化后，通過有機試劑提取脂肪酸甲酯；使用氣相色譜-質譜聯用儀進行磷脂脂肪酸的定性與定量分析；分析樣品的微生物群落結構。

本發明的優點是為準確、全貌地分析濃香型白酒窖池微生物群落結構、跟蹤分析微生物群落隨不同生產階段的演替規律，提供了準確、快速、全貌的分析手段；為微生物發酵過程的科學調控以及優質白酒的增產提供有利條件。

附圖說明

說明書附圖中為采集自四川某知名濃香型白酒廠窖池的微生物群落結構組成的載荷圖。

具體實施方式

(固態樣品預處理)準確稱取5.0g樣品，加入30ml檸檬酸緩沖液(pH?4.0)，提取30min，4層紗布過濾，濾液2500r/min，離心15min，取上清液，10000r/min離心10min，傾去上清液，30ml檸檬酸緩沖液溶解，重復洗滌3次，收集菌團。

(液態樣品預處理)準確吸取20.0ml樣品，10000r/min離心10min，傾去上清液，10ml檸檬酸緩沖液溶解，重復洗滌3次，收集菌團。