[發(fā)明專利]一種腦炎病毒蛋白及其編碼基因與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010506184.0
• 申請日: 2010-10-09
• 公開（公告）號: CN101967186A
• 公開（公告）日: 2011-02-09
• 發(fā)明（設計）人: 常國輝;林磊;吳曉燕;柳洪濤;李靖;戶義;羅彥軍;張雨;孫偉;康曉平;楊銀輝;祝慶余
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C07K14/18
• 分類號: C07K14/18;C12N15/40;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N7/01;A61K39/39;A61K39/12;A61K48/00;A61P25/00;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種腦炎病毒蛋白及其編碼基因與應用。

背景技術(shù)

腦炎是由病毒直接侵犯或由病毒或其他異種蛋白引發(fā)的超敏反應所致的大腦急性炎癥性疾病。腦炎可以是病毒性感染原發(fā)的臨床表現(xiàn)，或者是繼發(fā)的臨床表現(xiàn)，引起原發(fā)的腦炎的病毒有脊髓灰質(zhì)炎病毒，?？刹《?、柯薩奇病毒等流行性病毒，或散發(fā)性的通過蚊子、蜱等節(jié)肢動物傳播的黃病毒屬的森林腦炎和批膜病毒科甲病毒屬的東方馬腦炎病毒等。

甲病毒為披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒屬(Alphavirus)成員，以蚊蜱等吸血昆蟲為傳播媒介，可引起多種人畜共患傳染病。近年來，國外已對多株甲病毒部分或全部序列測序。國內(nèi)對這類病毒的分子生物學研究亦取得一定的結(jié)果。已有的研究結(jié)果表明：該病毒屬中和抗體決定簇主要集中在結(jié)構(gòu)蛋白E1和E2等糖蛋白上，其中E2蛋白上所占比例更高。加之近年來腺病毒載體因具有安全性好、宿主范圍廣、感染效率高等多種優(yōu)點，被廣泛用于基因治療和基因工程疫苗研究，為此我們分析比較了多株甲病毒核苷酸序列，人工合成了同源性較高的3kb的核苷酸，利用腺病毒載體構(gòu)建重組基因工程疫苗，為預防和治療疾病奠定了基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是提供一種與腦炎病毒疫苗相關(guān)蛋白及其編碼基因。

本發(fā)明提供的蛋白QE，人工合成，是如下1)或2)的蛋白：

1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白；

2)將序列2的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由1)衍生的蛋白質(zhì)。

序列表中的序列2由982個氨基酸殘基組成，所述一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。

上述蛋白質(zhì)QE的編碼基因也是本發(fā)明保護的范圍，所述編碼基因為如下1)-4)中任一所示的基因：

1)序列表中序列1所示的DNA分子；

2)序列表中序列1自5’末端第1-2946位核苷酸所示的DNA分子；

3)在嚴格條件下與1)或2)限定的DNA分子雜交且具有相同功能的DNA分子；

4)與1)或2)限定的DNA序列至少具有90％同源性且具有相同功能的DNA分子。

含有上述編碼基因的重組載體、轉(zhuǎn)基因細胞系、重組菌、表達盒或重組病毒也是本發(fā)明保護的范圍。

所述重組載體為pAdeasy-1和重組穿梭質(zhì)粒經(jīng)過同源重組得到的；所述重組穿梭質(zhì)粒是在載體pShuttle-CMV的KpnI和HindIII酶切位點間插入所述編碼基因得到的。

所述重組病毒為重組腺病毒；所述重組腺病毒為將上述蛋白的編碼基因轉(zhuǎn)染宿主細胞獲得的重組腺病毒。

所述宿主細胞為真核細胞，優(yōu)選為離體的哺乳動物細胞，尤其優(yōu)選為HEK-293細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種疫苗。

本發(fā)明提供的疫苗，其活性成分為如下任意一種：

1)所述的蛋白；2)所述編碼基因；3)所述重組腺病毒。

上述重組腺病毒在制備疫苗中的應用也是本發(fā)明保護的范圍。

所述疫苗為腦炎病毒疫苗。

上述重組腺病毒在制備提高IFN-γ活性的增強劑中的應用也是本發(fā)明保護的范圍。

本發(fā)明的實驗證明，從腦炎病毒克隆出QE通過轉(zhuǎn)染HEK-293細胞而組裝成攜帶有目標抗原基因的重組腺病毒vAd-QE。重組腺病毒vAd-QE感染293細胞能有效表達目的蛋白；通過滴鼻途徑接種BalB/C小鼠，利用間接免疫熒光技術(shù)檢測特異性抗體水平，結(jié)果表明，所構(gòu)建的重組腺病毒雖然產(chǎn)生特異性抗體的時間和維持的水平有所不同，但均產(chǎn)生了較好體液免疫反應，為進一步開展免疫保護實驗提供了重要的數(shù)據(jù)支持。由于病毒在機體內(nèi)極微量的蛋白表達即可激起免疫反應，因此構(gòu)建的攜帶有腦炎病毒結(jié)構(gòu)基因的重組腺病毒vAd-QE，有希望成為腦炎基因工程疫苗的候選疫苗株。

附圖說明

圖1為pAdtrack-QE酶切鑒定圖

圖2為重組質(zhì)粒Pac?I酶切和PCR鑒定

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。