[發(fā)明專利]高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法篩查奶類制品中β-內(nèi)酰胺酶類解抗劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010505215.0
• 申請日: 2010-10-13
• 公開（公告）號: CN102033102A
• 公開（公告）日: 2011-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭寅龍;許哲;張立;王昊陽;張菁
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64;G01N1/28
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 鄔震中

1.一種奶類制品中β-內(nèi)酰胺酶類解抗劑的高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測分析方法，其特征是對β-內(nèi)酰胺酶催化奶類制品中含β-內(nèi)酰胺環(huán)底物進(jìn)行開環(huán)反應(yīng)過程的檢測，通過高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測方法分析開環(huán)產(chǎn)物的相對生成量，來反映奶制品中含有的β-內(nèi)酰胺酶量的高低；所述的β-內(nèi)酰胺酶底物是文斯內(nèi)酯、青霉素類抗生素、頭孢菌素類抗生素、頭霉素類抗生素或頭孢菌素類抗生素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的奶類制品中β-內(nèi)酰胺酶類解抗劑的高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測檢測分析方法，其特征是將奶制品樣品采用高速離心方法進(jìn)行前處理；通過β-內(nèi)酰胺酶底物的開環(huán)產(chǎn)物量來反映奶制品中含有的β-內(nèi)酰胺酶濃度；β-內(nèi)酰胺酶底物的開環(huán)產(chǎn)物通過高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測方法進(jìn)行定性和相對定量分析；所述的β-內(nèi)酰胺酶底物是文斯內(nèi)酯、青霉素類抗生素、頭孢菌素類抗生素、頭霉素類抗生素或頭孢菌素類抗生素。

3.如權(quán)利要求1或2所述的奶類制品中β-內(nèi)酰胺酶類解抗劑的高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測檢測分析方法，其特征是所述的β-內(nèi)酰胺類底物的酶催化的水解開環(huán)反應(yīng)，通過下述步驟實(shí)現(xiàn)：(1)將β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品溶液用10mmol·L^-1Tris-HCl?pH?7.0稀釋至6×10^-5，6×10^-4，6×10^-3，6×10^-2，6×10^-1U·mL^-1；(2)將奶制品樣品采用高速離心方法進(jìn)行前處理，取中間層的含有β-內(nèi)酰胺酶的底物用10mmol·L^-1Tris-HCl的pH?7.0緩沖液稀釋成1.0mmol·L^-1的β-內(nèi)酰胺酶底物溶液；(3)將上述(2)的含有β-內(nèi)酰胺類抗生素的底物溶液與(1)的β-內(nèi)酰胺酶溶液各10μL混合，15℃-35℃下反應(yīng)2-6h；然后將反應(yīng)溶液直接進(jìn)行高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測檢測；所述的Tris是三羥甲基氨基甲烷。

4.如權(quán)利要求2所述的奶類制品中β-內(nèi)酰胺酶類解抗劑的高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測檢測分析方法，其特征是所述的檢測牛奶樣本中的β-內(nèi)酰胺酶時，將牛奶與青霉素溶液(0.1-10mmol·L^-1)以體積比8∶1-2∶1混合，25℃反應(yīng)2-6h；將反應(yīng)后的溶液室溫下10000rpm轉(zhuǎn)速離心10-25min；取轉(zhuǎn)速離心后的中間的澄清溶液點(diǎn)樣，直接進(jìn)行高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測檢測分析。

5.如權(quán)利要求1或2所述的高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測分析，其特征是所述的高通量基質(zhì)輔助激光解析的激光能量控制在幅值的20～30％，質(zhì)量掃描范圍100～500Da；使用聚乙二醇PEG-200與PEG-400做質(zhì)量校正，所述的PEG-200和PEG-400用v/v＝1/1的甲醇/水溶液配成10μg·μL^-1溶液使用；以二羥基苯甲酸(DHB)溶于等體積比混合的水/甲醇溶液，配成150mg·mL^-1的溶液作為基質(zhì)溶液，吸取1μL基質(zhì)溶液點(diǎn)于樣品靶上，自然風(fēng)干后點(diǎn)1μL樣品溶液，自然風(fēng)干，將樣品靶放入離子源進(jìn)行高通量基質(zhì)輔助激光解析-質(zhì)譜法檢測。