[發明專利]蠟蚧霉黃色無紡布菌劑及制備方法

無效

• 申請號: 201010301119.4
• 申請日: 2010-02-03
• 公開（公告）號: CN101889588A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 王聯德;尤民生;黃建;姜榮良;林成輝
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01N63/04
• 分類號: A01N63/04;A01N25/00;A01P7/04;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種蠟蚧霉黃色無紡布菌劑，其特征在于：所述菌劑以蠟蚧輪枝菌為有效成分，將蠟蚧輪枝菌經過培養、發酵后的發酵液中浸入無紡布條，并在無紡布條上培養出孢子得到蠟蚧霉黃色無紡布菌劑。

2.一種如權利要求1所述的蠟蚧霉黃色無紡布菌劑的制備方法，其特征在于：制備步驟包括：菌種的取得、一級斜面菌種培養、液體種子培養、液體發酵罐生產和無紡布菌條的接種培養。

3.根據權利要求2所述的蠟蚧霉黃色無紡布菌劑的制備方法，其特征在于：具體制備步驟包括：

A、菌種的取得：

LFZ0408菌株，其保藏號為CGMCC?No.3521，分離自粉虱的蠟蚧霉[Lecanicillium(Verticillium)lecanii]；

B、一級斜面菌種培養：

將所述LFZ0408菌株接種于PDA斜面培養基，放入25℃培養箱，培養7-9天，待菌絲長滿斜面并產孢時，轉入搖瓶進行液體種子培養；

C、液體種子培養：

在500ml三角瓶中，裝入200ml的液體種子培養基，以1.5pa/kg高壓滅菌30min，待冷卻至40±1℃，在超凈工作臺內，從斜面菌種子刮取2支培養好的一級斜面菌種的孢子粉到無菌的體積濃度為0.01％的Tween80水溶液中，刮取試管的規格為180mm×15mm，利用高速分散器使孢子分散均勻，然后將該菌懸浮液接液體培養基中，置于恒溫振蕩培養箱，23-25℃，140轉/分，培養5-7天即可；

D、液體發酵生產：采用三級發酵：

(1)、一級種子罐生產

取50L氣升式發酵罐，裝入35L液體培養基，溫度95℃-100℃，并加入消泡劑10.5ml，在0.15MPa壓力下，保壓25-40min，消毒冷卻后將4瓶步驟(3)培養好的500ml搖瓶種子接入培養，24-26℃，通氣量1∶0.5V/V·min，保壓0.05-0.07MPa，經60-72hr通氣培養，達到對數生長期后，接入二級種子罐；

(2)、二級種子罐生產

取100L氣升式發酵罐，裝入70L液體培養基，溫度95℃-100℃，并加入消泡劑18ml，在0.15MPa壓力下，保壓25-40min，消毒冷卻后將一級種子罐種子35L全部接入二級種子罐培養，溫度24-26℃，通氣量1∶0.5V/V·min，保壓0.05-0.07MPa，經60-72hr通氣培養，達到對數生長期后，接入三級種子罐；

(3)、三級種子罐生產

取1T氣升式發酵罐，裝入700L液體培養基，pH?6.0-7.2，加入的熱水溫度95℃-100℃，并加入消泡劑210ml，通入蒸汽加熱到121℃，保壓30min，冷卻至24-26℃，將二級種子罐培養好的液體種子70L全部接入，通氣培養，通氣量1∶0.4-0.5?V/V·min，攪拌轉速150r/m，罐壓0.05-0.07MPa，培養時間72-96hr；

當發酵液中出現大量菌絲及液生孢子時，殘糖在1％以下，發酵液較粘稠，另外鏡檢菌絲變細、菌絲體中無明顯的液泡，發酵液中無明顯斷裂的菌絲，可放罐；

E、將黃色無紡布條在1.5Pa/Kg高壓滅菌30min后，冷卻后按700條無紡布條接入100L發酵液的比例浸入已培養好的發酵液，在20-28℃，濕度為RH93％的培養室架上平鋪培養5天，待菌條上長滿菌絲后，移入溫度在20-28℃，濕度為RH90％的培養室繼續培養3-5天，使菌條上長滿大量孢子，風干即可。

4.根據權利要求3所述的蠟蚧霉黃色無紡布菌劑的制備方法，其特征在于：所述的PDA斜面培養基包括：馬鈴薯200g，蛋白胨10g，葡萄糖40g，瓊脂20g，水1000ml。

5.根據權利要求3所述的蠟蚧霉黃色無紡布菌劑的制備方法，其特征在于：所述的液體種子培養基包括：在1000ml培養基中含40g葡萄糖、20g酵母浸膏、0.5gKH2PO4，各組分混合后加水補至1000ml，并用飽和NaOH水溶液調pH至6.50。

6.根據權利要求3所述的蠟蚧霉黃色無紡布菌劑的制備方法，其特征在于：所述的氣升式發酵罐中的液體培養基包括：在1000ml培養基中含20g葡萄糖、20g酵母粉、0.5gKH₂PO₄，加麩皮煮汁，即在800ml水中加麩皮60g煮30min，一層紗布過濾，去除殘渣，各組分混合后加水補至1000ml，并用飽和NaOH水溶液調pH至6.5。