[發明專利]一種分離毛白楊胚珠及珠心的方法

無效

• 申請號: 201010300490.9
• 申請日: 2010-01-20
• 公開（公告）號: CN101792731A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發明（設計）人: 洪亞平;張亞冰
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 陳浩

技術領域

本發明涉及一種分離毛白楊胚珠的方法，同時還涉及一種分離毛白楊珠心的方法，屬于 植物顯微觀察技術領域。

背景技術

毛白楊的胚珠微小，手工分離其胚珠及珠心比較困難，采用非酶解技術分離出的珠心很 難維持其原有形態。目前，多是借助于纖維素酶和果膠酶等的酶解技術，完成植物珠心、胚 囊、卵細胞和合子等微小結構的人工分離(周嫦等1982年發表的論文“被子植物胚囊酶法分 離的研究：固定材料的分離技術與顯微觀察”、楊弘遠等1998年發表的論文“被子植物離體 受精與合子培養研究進展”)。由于胚囊和合子經酶處理后，可能對其存活、發育及人工培 養等產生不良的影響，楊弘遠等學者提出應在卵細胞等的分離過程中減少酶的影響(楊弘遠 等1998年發表的論文“被子植物離體受精與合子培養研究進展”、何玉池等2004年發表的論 文“煙草合子離體培養再生可育植株”)。因此，研究操作簡單的分離珠心等微小結構的新 方法仍具有比較重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種分離毛白楊胚珠的方法，不僅可以維持分離結構的完整性， 而且可以避免酶法分離過程中酶對細胞結構的影響等問題。

本發明的目的還在于提供一種分離毛白楊珠心的方法，不僅可以維持分離結構的完整性 ，而且可以避免酶法分離過程中酶對細胞結構的影響等問題。

為了實現上述目的，本發明的技術方案采用了一種分離毛白楊胚珠的方法，包括將毛白 楊的雌花從雌花序上摘下，放在膠塊上；在解剖鏡下，將雌花的苞片、花盤分別除去，然后 沿子房側壁上的背縫線將子房縱向剖開，可看到子房室內著生在心皮上的胚珠，將珠柄和胚 珠從心皮上分離下來即可。

所述的膠塊是口香糖去除糖分后形成的膠塊，也可以使用泡泡糖、口香糖膠基等能達到 分離所需的粘度、且方便固定分離材料的膠性材料均可。

本發明的技術方案還采用了一種分離毛白楊珠心的方法，包括以下步驟

毛白楊胚珠的分離：將毛白楊的雌花從雌花序上摘下，分離出胚珠及珠柄；

毛白楊珠心的分離：將分離出的珠柄和胚珠放在膠塊上，并使珠柄粘在膠塊上；在胚珠 與珠柄的交界處，向上將胚珠的珠被輕輕地縱向劃開，然后在割縫處將珠被由下至上輕輕挑 開、掀起，逐步暴露出胚珠內的珠心；最后在珠心與珠被的連接處割斷，即可將珠心從珠被 上完全分離出來。

所述的膠塊是口香糖去除糖分后形成的膠塊，也可以使用泡泡糖、口香糖膠基等能達到 分離所需的粘度、且方便固定分離材料的膠性材料均可。

在毛白楊雌花(如圖1所示)中，雌蕊由2個心皮構成，在其子房的左、右側壁上各有一條 縱向的凹溝，即為背縫線。在分離毛白楊胚珠時，可用解剖針(或鑷子的一個尖頭)沿著子 房側壁上的一條背縫線將子房縱向剖開，把剖開的子房壁掀開并將其粘在膠塊上(如圖2所示 )；也可以分別沿著子房左、右側壁上的兩條背縫線將子房縱向剖開，并將剖開的兩片子房 壁由上至下掀開(或進一步將其外壁粘在膠塊上)(如圖3所示)，即可觀察到胚珠與心皮的 位置和著生關系。子房室內一般有兩個胚珠著生，偶而也會出現三個胚珠，三個胚珠等大或 其中一個胚珠體積很小，等大的三個胚珠與正常的胚珠無形態上的差異(如圖4所示)，三個 胚珠不等大時，體積較小的胚珠的珠柄細長，可能是退化的不育胚珠(如圖5所示)。分離出 的胚珠經染色、透明后可觀察到珠心與珠被之間存在著狹窄的間隙(如圖6所示)，如果將染 色后的胚珠在透明液中浸泡過夜，可使珠心強烈收縮，珠心與珠被之間的間隙以及珠孔道均 顯著增大(如圖7所示)，倒生胚珠的特征十分明顯，這為珠心的手工分離提供了依據，需要 注意的是用于珠心分離的胚珠應是新分離出的未經染色的胚珠。本發明方法分離出的胚珠可 以清楚的觀察到經水培的雌花中絨毛的著生位置，對開花后的雌枝水培數天，即可在子房室 內看到珠柄的表面生出細長而密集的絨毛(如圖8所示)，將胚珠和珠柄從心皮上分離出來 后，可以發現細長的絨毛是由珠柄的表面生出(如圖9所示)。