[發(fā)明專利]人體唾液保存固定液及其制備與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010299215.X
• 申請(qǐng)日: 2010-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN102440234A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鮑曉妮;江三多;張?zhí)炝?/a>;彭麗娟;張健;魏寧;孫長(zhǎng)勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海泛亞生命科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種人體唾液保存固定液的配方、制備及應(yīng)用。

背景技術(shù)

在分子生物學(xué)科研中，血樣中的DNA提取在基因工程和分子生物學(xué)研究中占有重要地位。通常用于PCR反應(yīng)和其他分子測(cè)試的DNA主要從抗凝血中提取，但保存時(shí)間較長(zhǎng)的血樣，即使添加枸櫞酸鈉或EDTA抗凝劑，也會(huì)形成血塊，給提取帶來不便。同時(shí)，由于采集血液對(duì)人體能造成一定的創(chuàng)傷而且需要一定的專業(yè)技能才能完成，限制了血液作為DNA來源的廣泛應(yīng)用。

人體唾液中含有口腔黏膜脫落細(xì)胞，收集唾液作為DNA樣本來源有以下優(yōu)點(diǎn)：①無穿刺、無傷害取樣，避免了采血的痛苦和取尿的尷尬；②一些人群并不適合采血，如小孩、老人。另一些人群則抗拒取血，如某些精神疾病患者，患者的親屬；③簡(jiǎn)便易行，唾液收集只需離心管：④廉價(jià)、高效，不需要配備注射器、消毒用具，也不用培訓(xùn)專業(yè)的抽血人員.節(jié)省了大量人力物力；即使經(jīng)過2周的室溫存放，依然能提取出完整的基因組DNA。當(dāng)大范圍收集樣本時(shí)，唾液樣本適合在各地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室和收集點(diǎn)之間傳遞。

人體的唾液中99％是水，有機(jī)物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，無機(jī)物有鈉、鉀、鈣、氯等離子，同時(shí)還含有多種細(xì)菌、口腔脫落細(xì)胞等。因此，如何避免唾液腐敗、保持脫落細(xì)胞內(nèi)基因組DNA完整，對(duì)唾液作為基因組DNA來源的應(yīng)用至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種人體唾液保存固定液及其制備及應(yīng)用。

本發(fā)明的人體唾液保存固定液包括如下組分：蔗糖、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、MgCl2、異硫氰酸胍及水。

以質(zhì)量體積濃度計(jì)，蔗糖為0.05mol/L～0.5mol/L，MgCl₂為0.5mmol/L～20mmol/L，pH為7～10的Tris-HCl為1mmol/L～30mmol/L，異硫氰酸胍為0.5mol/L～10mol/L。

較佳的，以質(zhì)量體積濃度計(jì)，蔗糖為0.1mol/L～0.4mol/L，MgCl₂為2m?mol/L～15mmol/L，pH為7～10的Tris-HCl為3m?mol/L～20m?mol/L，異硫氰酸胍為1mol/L～6mol/L。

優(yōu)選的，以質(zhì)量體積濃度計(jì)，蔗糖為0.2mol/L～0.4mol/L，MgCl₂為2m?mol/L～10mmol/L，pH為7～9的Tris-HCl為5m?mol/L～15m?mol/L，異硫氰酸胍為2mol/L～5mol/L。

最佳的，蔗糖為0.25mol/L～0.35mol/L，MgCl₂為3m?mol/L～8m?mol/L，pH為7～8.5的Tris-HCl為8m?mol/L～12m?mol/L，異硫氰酸胍為2.5mol/L～3.5mol/L。

本發(fā)明人體唾液保存固定液的配制方法包括下列步驟：

(1)分別配制Tris-HCl緩沖液、蔗糖、MgCl₂及異硫氰酸胍的水溶液并滅菌；

(2)無菌條件下，將經(jīng)步驟1獲得溶液與無菌水一起按比例混合配制獲得人體唾液保存固定液。

本發(fā)明的人體唾液保存固定液可用于保存人體唾液。該固定液能夠殺滅唾液中含有的細(xì)菌、抑制核酶的活性，保存基因組DNA的完整性。

保存及基因組DNA抽提實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的唾液固定液具有很好的保存作用，其保存效果明顯優(yōu)于使用單一組分保存唾液，且成本較低，配制方便，有望成為唾液作為基因組DNA來源的廣泛應(yīng)用所必需的較佳固定液。

附圖說明

圖1實(shí)施例1抽提的唾液基因組DNA電泳圖

1為基因組DNA

圖2實(shí)施例2固定液固定后放置于不同溫度、不同時(shí)間的唾液樣本基因組DNA抽提瓊脂糖凝膠電泳圖

1為4℃放置2周

2為25℃放置2周

3為37℃放置2周

4為37℃放置1個(gè)月

圖3實(shí)施例3固定液處理后提取的唾液基因組DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后的瓊脂糖凝膠電泳圖條帶為擴(kuò)增片段DNA

圖4實(shí)施例4不同成分的固定液固定后的唾液樣本基因組DNA抽提瓊脂糖凝膠電泳圖固定液1無異硫氰酸胍；固定液2中無Mgcl2；固定液3中無Tris；固定液4中無蔗糖

圖5實(shí)施例5不同成分對(duì)提取唾液基因組DNA的因素效應(yīng)圖

圖6實(shí)施例5固定液處理后提取的唾液基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳圖