[發明專利]一種膽汁排泄實驗動物模型及建立方法

無效

• 申請號: 201010299204.1
• 申請日: 2010-10-08
• 公開（公告）號: CN102440848A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發明（設計）人: 蔡永明;劉昌孝;張宗鵬;司端運;申文晉;宋紫輝;王海榮;張駿;項宗尚;張春云
• 申請（專利權）人: 天津藥物研究院;天津市新藥安全評價研究中心
• 主分類號: A61D1/00
• 分類號: A61D1/00;A01K67/00
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技術領域

本發明屬于生命科學技術領域，具體涉及一種膽汁排泄實驗動物模型及建立方法。

背景技術

膽汁排泄是大多數藥物及其代謝物腎外排泄的最主要途徑之一。機體中許多重要的物質如維生素A、D、E、性激素、甲狀腺激素經膽汁排泄均較顯著。分子量300以上并有極性基團的藥物和代謝物亦主要從肝分泌進入膽汁排泄。膽汁排泄速率和程度受藥物的理化性質(分子量、化學結構、極性等)和某些生物學因素(動物種屬、年齡、性別、膽汁流量、藥物生物轉化過程等)的影響。同時由于藥物在體內存在腸肝循環，通過膽汁排泄研究對闡明藥物的藥代動力學和藥效動力學過程均具有重要意義。藥物及其代謝物的腸肝循環在藥物的遲滯排泄中起著重要作用，使某些藥物的藥代動力學曲線常出現雙吸收峰的特征。研究表明已烯雌酚、消炎痛、氯霉素、紅霉素、嗎啡等均可形成腸肝循環。

目前，藥物膽汁排泄研究的動物模型一般使用麻醉大鼠作膽管插管引流，手術完成后給藥，并以合適的時間間隔分段收集膽汁，進行藥物測定。大鼠屬嚙齒目動物，成年雄性大鼠體重可達300g～400g，雌性大鼠可達180g～270g。且大鼠無膽囊，它們的總膽管括約肌阻力很少，肝分泌的膽汁通過總膽管進入十二指腸，受十二指腸端括約肌的控制。利用大鼠模型對多種生物技術藥物包括蛋白質和多肽進行藥物膽汁排泄的研究，如重組人生長激素、重組人胸腺素、重組人內皮抑素等藥物。但根據SFDA和ICH-6有關生物技術藥物非臨床評價指導原則中規定，由于生物技術藥物大多僅作用于特定的受體產生藥效或毒性作用，很難與其它受體發生作用，所以選擇相關動物(即在動物體內具有生物活性)用于藥代動力學及非臨床安全性評價至關重要。化學藥物以代謝過程的差異來判斷相關動物，通常使用大鼠和犬進行評價，但對生物技術藥物而言，除非其在大鼠或犬體內具有生物活性，否則是不合適的。特別是干擾素類藥物，對大鼠、倉鼠、豚鼠等多種動物進行了藥效學相關動物篩選。結果表明，倉鼠、豚鼠為干擾素類藥物的藥效學相關動物。倉鼠體型較小，取血困難及動物來源受限較，難以滿足臨床前藥代動力學研究的要求。豚鼠為嚙齒目動物，體型適中，易于購買和飼養，是一種理想的實驗動物，在醫藥學和生物學研究方面起著重要的作用。由于豚鼠有膽囊，因此其膽汁排泄模型的建立方法與大鼠較為不同。對于一些不以大鼠為藥效學相關動物的藥物而言，豚鼠模型的建立填補了這類藥物膽汁排泄研究的空白，完善了臨床前藥代動力學研究的試驗技術和方法。本發明建立了豚鼠膽管插管的動物模型，并已應用于聚乙二醇化重組集成干擾素變異體注射液和¹⁵⁸val-重組人集成干擾素α注射液的膽汁排泄研究。當前，國內外均未見利用豚鼠建立膽管插管的實驗動物模型進行藥物膽汁排泄研究的相關報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種膽汁排泄實驗動物模型的建立方法。為了實現上述發明的目的，本發明采用如下的技術方案：

1.將豚鼠麻醉(20％烏拉坦，1.2g/kg，i.p.)后，仰位固定于固定板上，將劍突上下的腹部被毛用剃毛刀剃干凈。常規消毒后，以劍突為中心點在腹部正中線使用手術刀縱向切開皮膚(切口長度2.5～3.0cm)。使用眼科鑷子提起腹肌，14cm直尖頭手術剪剪開腹肌，切口長度約2.5cm左右；用酒精棉將手術切口周圍和手術者的手指消毒后，兩手手指夾住切口的兩側稍向前方推并壓迫腹部，暴露膽囊。輕輕將透明的膽囊拉出，剝離膽囊管周圍膜樣結締組織，并將膽囊管近膽總管一端用7^#手術縫合線結扎后，回復原位。

2.膽總管開口于十二指腸，使用止血鉗分離膽總管周圍膜樣結締組織。將其近十二指腸端用眼科彎尖頭手術剪作一斜向切口，插入外徑為1.5mm的聚乙烯導管，深度為6-7mm，7^#手術縫合線結扎固定后，回復原位。

3.檢查腹腔及結扎部，常規縫合肌層與皮層，消毒，并使用生理鹽水浸濕的醫用紗布覆蓋創面。將收集膽汁的導管口保留在外。手術完成后立即給藥，并于合適的時間間隔分段收集膽汁，測定藥物或代謝物的濃度。如在收集過程中動物清醒，可補充適量麻醉劑。

本發明利用豚鼠模型進行膽汁排泄研究，對豚鼠膽囊進行結扎，使膽汁從肝臟分泌后不經膽囊貯存，直接進入膽總管。繼而進行膽總管插管，將膽汁引流至5ml離心管中以備后續分析。該模型手術過程簡便、快速、成功率高。可對膽汁中藥物實時排泄量、排泄速率、累積排泄量及累積排泄速率進行綜合分析。

附圖說明

圖1是豚鼠皮下注射PEG-IFN-SA?18.6μg/kg后膽汁排泄曲線；