[發(fā)明專利]染色體異常的產(chǎn)前診斷方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010298456.2
• 申請日: 2004-10-08
• 公開（公告）號: CN101985619A
• 公開（公告）日: 2011-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: C·R·坎托爾;C·丁
• 申請（專利權(quán)）人: 波士頓大學信托人
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 梁謀;李連濤

本申請是2004年10月18日申請的中國國家申請?zhí)枮?00480036100.4，國際申請?zhí)枮镻CT/US2004/033175，發(fā)明名稱為“染色體異常的產(chǎn)前診斷方法”的發(fā)明申請的分案申請。?

相關(guān)申請的交叉引用

依據(jù)美國法典第35章第119(e)條，本申請要求2003年10月8日申請的美國臨時申請?zhí)?0/509,775的權(quán)益，該臨時申請的內(nèi)容通過引用全部結(jié)合到本文中。?

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及染色體異常的無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷方法。本發(fā)明的方法可以用來檢測染色體DNA缺失和重復。在優(yōu)選的實施方案中，所述方法用于診斷染色體非整倍性及相關(guān)疾病，例如唐氏綜合征(Down′sSyndrome)和特納綜合征(Turner′s?Syndrome)。本發(fā)明還提供鑒定甲基多態(tài)性探針的方法，所述甲基多態(tài)性探針可用于檢測胎兒染色體異常。?

發(fā)明背景

染色體異常是造成大量先天缺陷(包括精神發(fā)育遲緩)的主要原因。異常一般表現(xiàn)為染色體DNA重復和缺失，以及染色體非整倍性，后者指的是完整的染色體的異常存在或缺失。當生物體具有少于或多于正常二倍體的染色體數(shù)量時，就會產(chǎn)生大量異常特征并引起多種綜合征。唐氏綜合征，亦稱21三體綜合征，是染色體非整倍性最常見的例子，包括一條額外的21號染色體。其它常見的染色體非整倍性有13三體綜合征、18三體綜合征、特納綜合征和克蘭費爾特?綜合征(Klinefelter′s?Syndrome)。?

對于染色體異常產(chǎn)前檢測的選擇主要限于有創(chuàng)性方法，這些方法會有致使胎兒丟去的風險，雖小但的確有一些。最常用的檢測異常的方法是羊膜穿刺術(shù)。然而，由于羊膜穿刺術(shù)是有創(chuàng)性方法，因此通常只用于高齡產(chǎn)婦，因為高齡產(chǎn)婦的胎兒出現(xiàn)染色體異常的風險有所增加。因此，建立用于胎兒染色體異常診斷的無創(chuàng)性方法非常有益，這些方法可以使眾多的準媽媽受益。美國專利號4,874,693中已經(jīng)描述了這樣一種無創(chuàng)性方法，該專利公開了通過監(jiān)測母親的人絨毛膜促性腺激素(HCG)水平，檢測胎盤機能障礙以顯示染色體異常的方法。然而，雖然這種方法是無創(chuàng)性的并且能夠用來篩選所有年齡段的準媽媽，但它不能作為具體染色體異常存在的診斷方法，也不能作為具體染色體異常存在的保證。?

現(xiàn)有的產(chǎn)前診斷方法除了取樣步驟是有創(chuàng)性的，操作也耗時費力。例如，吉姆薩(Geisma)染色法是最廣為使用的技術(shù)，這種方法要求實驗時，細胞處于細胞分裂中期或者正在分裂。每對染色體要染上特征性的明帶譜或暗帶譜。采用這種方法，所有的染色體能夠被一一區(qū)分并容易展現(xiàn)任何結(jié)構(gòu)上的或數(shù)量上的異常性質(zhì)。吉姆薩染色法不是總能檢測出精細的染色體重排。如果懷疑染色體重排，但用這種方法檢測不到，進一步的詳細分析可以使用熒光原位雜交(FISH)或圖譜核型分析(SKY)進行。用吉姆薩染色法，測試結(jié)果需要一到兩周。?

SKY就是用不同探針(染料顏色)對每個中期染色體染色的技術(shù)。因為每個染色體特異性探針都會發(fā)射自身所特有的熒光波長，因此能夠容易地觀察到結(jié)構(gòu)重排，并能夠容易地鑒定所涉及的染色體。由于SKY要求細胞是處于細胞分裂中期的細胞，因此結(jié)果需要一到兩周。?

FISH就是用熒光探針(染料)與特異性個別染色體或染色體的某些區(qū)結(jié)合或雜交的技術(shù)。受到影響的染色體或染色體區(qū)發(fā)熒光或是發(fā)出信號，可以通過熒光顯微鏡目測分析它們的存在或缺失。FISH?通常用于鑒定具體的染色體重排或快速診斷出異常染色體存在的數(shù)量。對于異常染色體數(shù)量，F(xiàn)ISH是目前最快的診斷異常染色體數(shù)量的方法。速度較快是因為分析用的細胞不必是處于細胞分裂中期的細胞。因此，一般2到3天就可以知道測試結(jié)果。?

因此，本領(lǐng)域需要無創(chuàng)性的產(chǎn)前診斷方法，這些方法能夠快速而準確地幫助確定染色體畸變的存在和類型。?

發(fā)明概述

本發(fā)明描述了用于染色體異常例如染色體非整倍性的無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷方法，所述方法可以快速地做出準確的結(jié)果。本發(fā)明方法使用的是得自孕婦的血漿樣本。已經(jīng)顯示出，除了母體血漿中有較小百分比的胎兒細胞外，母體樣本還含有較小百分比的胎兒DNA。?

常染色體具有一個母親遺傳的等位基因(A，如下表所示)和一個來自父親的等位基因(B，如下表所示)。有一種情況，其中胎兒DNA占母體血漿樣本中存在的總DNA的約2％，胎兒等位基因的存在狀況描述如下：?

因此，由于正常與三體之間的B％的差異僅僅是(2/200-2/202)即0.01％，因此這種差異太小了，即便采用現(xiàn)有最好的定量方法也難以發(fā)現(xiàn)。?