[發明專利]一種簾蛤科線粒體COI基因擴增引物的篩選方法

無效

• 申請號: 201010297625.0
• 申請日: 2010-09-26
• 公開（公告）號: CN101979536A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 陳軍;李琪;孔令鋒
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種簾蛤科線粒體COI基因擴增引物的篩選方法，其特征是a、登陸美國國立生物技術信息中心，下載簾蛤科貝類的線粒體全序列；b、將下載的序列用BioEdit軟件比對分析，確定序列兩端保守區域；c、在確定的保守區域用引物設計軟件Primer?Premier?5設計多對引物并合成；d、提取簾蛤科貝類DNA，然后將合成的引物在相應反應體系下進行PCR擴增；e、進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，篩選出條帶單一、擴增效率高的一組雞尾引物，此組雞尾引物由一對兼并引物和一對普通引物組成，其正向引物為COIF-VLT：ACA?AATCAY?AAR?GAY?ATY?GG和COIF-VSA：ACC?AAT?CAT?AAA?GAT?ATT?GG，反向引物為COIR-VP：CCT?GTA?GGA?ATA?GCA?ATA?AT和COIR-VJ：CCW?GTW?GGR?ACA?GCA?ATAAT。

2.如權利要求1所述的簾蛤科線粒體COI基因擴增引物的篩選方法，其特征是所述的簾蛤科貝類的線粒體全序列為3條，下載于美國國立生物技術信息中心。

3.如權利要求1所述的簾蛤科線粒體COI基因擴增引物的篩選方法，其特征是所述的簾蛤科貝類樣品為2003年至2010年從中國南北沿海采集的56種簾蛤科貝類的312個個體。

4.如權利要求1所述的簾蛤科線粒體COI基因擴增引物的篩選方法，其特征是所述的反應條件體系為：100ng模板DNA，0.25U?Taq聚合酶，1×PCR緩沖液，0.2mM?dNTPs，1.5mM?Mgcl₂，引物各1μM。

5.如權利要求1所述的簾蛤科線粒體COI基因擴增引物的篩選方法，其特征是所述的PCR擴增條件為：94℃預變性3min，94℃變性1min，48-52℃退火1min，72℃延伸1min，共35個循環，最后72℃延伸5min。

6.如權利要求1所述的簾蛤科線粒體COI基因擴增引物的篩選方法，其特征是所述的瓊脂糖凝膠電泳檢測所用的瓊脂糖質量百分濃度為1％-1.5％。