[發(fā)明專利]宏基因組文庫的保存和篩選方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010297594.9 | 申請日： | 2010-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN101967683A | 公開（公告）日： | 2011-02-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 曾英;付小莉;王浩鑫 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院昆明植物研究所 |
| 主分類號： | C40B30/00 | 分類號： | C40B30/00;C40B40/08;C12N7/00 |
| 代理公司： | 云南協(xié)立專利事務(wù)所 53108 | 代理人： | 馬曉青 |
| 地址： | 650204 *** | 國省代碼： | 云南;53 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 宏基 文庫 保存 篩選 方法 | ||
1.宏基因組文庫的保存和篩選方法，其特征在于所述宏基因組文庫的保存是用小量的文庫包裝顆料感染感受態(tài)細(xì)胞，保溫后將其等分成96份或96的整倍數(shù)，振蕩培養(yǎng)，加入甘油保存；所述宏基因組文庫的篩選是用氫氧化鈉加十二烷基磺酸鈉溶液漂洗雜交膜，去除探針的同時保留膜上的DNA模板用于不同探針的多次膜雜交。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的宏基因組文庫的保存和篩選方法，其特征在于所述宏基因組文庫的保存是取1～100微升的文庫包裝顆粒與1～10毫升感受態(tài)細(xì)胞混勻，25～39℃保溫20～60分鐘，將該細(xì)胞混合物等分成96份或96的整倍數(shù)，每份加0.2-2ml?LB培養(yǎng)液，所述LB培養(yǎng)液為胰蛋白胨10克/升+酵母提取物5克/升+氯化鈉5克/升，pH7.0，在28～39℃振蕩培養(yǎng)12～24小時，加入甘油保存；所述宏基因組文庫的篩選是把已進(jìn)行過探針雜交的雜交膜放入預(yù)熱的0.2M氫氧化鈉加以重量/體積即克/100ml為單位的0.1％的十二烷基磺酸鈉溶液中，在37℃、55℃、68℃漂洗兩次，每次10分鐘、20分鐘、30分鐘，然后用300mM氯化鈉加30mM檸檬酸鈉溶液徹底漂洗，去除探針的同時保留膜上的DNA模板用于不同探針的多次膜雜交。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的宏基因組文庫的保存和篩選方法，其特征在于感受態(tài)細(xì)胞的獲取是挑取前一天劃線培養(yǎng)的EPI300單克隆至5毫升LB培養(yǎng)基中，37℃下每分鐘200轉(zhuǎn)培養(yǎng)12小時；按1∶10的比例轉(zhuǎn)接至15毫升新鮮添加了10mM硫酸鎂的LB培養(yǎng)液中，37℃下每分鐘200轉(zhuǎn)培養(yǎng)100分鐘使細(xì)胞密度達(dá)到OD600約0.9，由此獲得感受態(tài)細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的宏基因組文庫的保存和篩選方法，其特征在于已進(jìn)行過探針雜交的雜交膜分兩次在68℃中處理30分鐘能完全去除探針，將去除探針的雜交膜用不同探針再進(jìn)行多次雜交。
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